摘要：为了研究彩色马铃薯块茎中花色苷积累的分子机制,明确查尔酮合成酶(CHS)在花色苷合成途径中作用,本研究以彩色马铃薯品种‘红美’块茎作为实验材料,根据GenBank数据库中已注册马铃薯CHS基因的cDNA序列设计引物,通过RT-PCR方法克隆了一个CHS基因,命名为StCHS1b。StCHS1b基因cDNA序列共1 223 bp,开放阅读框为1 170 bp,编码389个氨基酸。分子质量约为42.48 kD,理论等电点为6.3。生物信息学分析表明,该蛋白为亲水性的稳定蛋白质,而且含有CHS家族序列标签的保守区域GVLFGFGPGLT,无信号肽,不含有跨膜区。Blastn分析表明,StCHS1b基因序列与其他物种的CHS基因序列均具有较高同源性,编码区氨基酸相似性高达99%。进化分析表明,彩色马铃薯StCHS1b与番茄SlCHS、茄子Sm CHS、辣椒CaCHS、烟草NtCHS和黑果枸杞LrCHS聚在同一个分支,都属于茄科,它们的亲缘关系最近,与苹果MdCHS和覆盆子RiCHS亲缘关系较远。

摘要：以深圳红树自然保护区的木榄为材料,根据GenBank上已公布的钙调蛋白氨基酸保守区的碱基序列设计引物,RT-PCR扩增木榄CaM序列,获得cDNA全长735bp,命名为BgCaM(GenBank登录号:GU722140)。生物信息学分析表明,BgCaM与拟南芥、花生、大麦、榉木及甘薯等植物钙调蛋白氨基酸保守区具有较高同源性。BgCaM基因完整开放阅读框为450bp,编码149个氨基酸,预测蛋白等电点为4.11,分子量为16.8kD。分析基因序列和相应酶切位点,将扩增获得的BgCaM基因完整开放阅读框与中间表达载体相应酶切产物进行连接,构建植物表达载体pC13rd29A-BgCaM,为BgCaM功能分析和进一步利用奠定了基础,为植物转基因研究与应用又增添了一个新的基因源。

摘要：【目的】筛选高丹草SRAP-PCR反应的最佳体系。【方法】采用单因素和正交试验设计相结合的方法,对影响高丹草SRAP-PCR反应体系的5个因素(dNTP、DNA、引物、Taq DNA聚合酶、Mg^(2+))进行优化;并对高丹草SRAP-PCR优化体系进行验证。【结果】高丹草SRAP-PCR的最佳反应体系为:dNTP浓度275μmol/L、模板DNA浓度3.0 ng/μL、引物浓度1.1μmol/L、Taq DNA聚合酶用量1.00 U、Mg^(2+)浓度2.25 mmol/L,用ddH_(2)O补足至20μL。【结论】筛选出的SRAP-PCR最佳体系扩增条带数目多、多态性丰富、重复性好。

摘要：[目的]克隆洋草麦肉桂醇脱氢酶基因(HdCAD),揭示HdCAD基因的序列特性,对HdCAD蛋白进行生物信息学分析。[方法]以洋草麦转录组数据中的HdCAD为参考序列,设计1对特异引物,利用RT-PCR技术克隆HdCAD基因;利用生物信息学软件对HdCAD基因序列进行分析,对HdCAD蛋白的理化性质、蛋白结构、亚细胞定位等进行预测和系统进化树分析。[结果]HdCAD基因编码区全长1071 bp,共编码356个氨基酸。HdCAD蛋白含有17个磷酸化位点,不含有跨膜结构域和信号肽位点,预测定位在细胞质中;二级结构中,以无规卷曲元件占比最高;含有1个典型的CAD1结构域,属于MDR超家族。系统进化树分析结果显示,HdCAD蛋白与二粒小麦、节节麦、西藏裸大麦亲缘关系最近。[结论]该试验成功克隆HdCAD基因、预测了该基因编码蛋白的序列特征和功能,可以为今后研究洋草麦抗非生物胁迫功能提供参考。

摘要：CRISPR/Cas9是近年来快速发展起来的一种基因编辑技术,被广泛应用在多种物种中。Cas9是RNA导向的DNA内切酶,通过设计特异的导向RNA序列,将其与Cas9蛋白结合形成复合体。在基因组靶位点切开双链DNA,利用非同源末端连接(NHEJ)和同源重组(HR)的方式进行DNA修复时,会造成靶标核苷酸序列缺失、替换或引入外源DNA序列,形成定点核苷酸序列突变,达到精准修饰基因的目的。CRISPR/Cas9是相当简单和用途广泛的技术手段。该综述介绍了CRISPR/Cas9作用机理、技术路线及其在农作物品种改良研究中的应用,为该技术在农业领域的研究提供有益参考。