摘要：根据拟南芥AtICE1蛋白序列在苹果基因组中Blast比对得到苹果同源蛋白序列,利用DNAMAN软件设计特异性引物并克隆苹果冷信号基因(MDP0000662999),暂命名为MdICE1。以从新疆红肉苹果与‘富士’杂交F_1代中选出的‘紫红3号’叶片诱导出的红色愈伤组织为试材克隆MdICE1,测序发现该基因的开放阅读框长度为1 626 bp,编码541个氨基酸。进化树分析表明,MdICE1与AtICE1在同一进化支上,推测它们具有相似的功能。氨基酸序列比对发现,MdICE1存在bHLH基序。低温处理有利于苹果愈伤组织花青苷的累积;与培养在24℃下的愈伤组织相比,低温(8℃)诱导苹果愈伤组织冷信号基因MdICE1以及花青苷合成相关转录因子基因MdMYB10和MdbHLH3的表达。酵母双杂交试验证明MdICE1可以与MdMYB10相互作用;亚细胞定位发现MdICE1蛋白存在于细胞核内;转化大肠杆菌并诱导获得了MdICE1的重组蛋白,为进一步研究MdICE1蛋白在花青苷代谢途径中的功能奠定了基础。

摘要：【目的】建立文冠果体细胞胚胎发生及再生植株体系,所建立的高效再生体系可为培育文冠果优良株系以及文冠果的遗传转化的基因工程奠定基础。【方法】以文冠果幼龄胚、中期胚、成熟胚为外植体,设计不同浓度生长素、细胞分裂素的正交实验,通过正交实验,确定文冠果外植体、激素浓度配比对提高愈伤组织诱导率的影响,确定文冠果愈伤组织诱导增殖、不定芽分化、伸长和生根培养最适基本培养基及其中各激素的浓度配比,建立文冠果组织培养再生体系。【结果】在1 mg/L 6-BA和0.5 mg/L NAA的激素配比中,诱导出嫩绿色的、结构致密的愈伤组织,诱导率为80.46%,诱导愈伤组织形成的最佳品种为‘WF15’的中期胚;在1 mg/L 6-BA和0.3 mg/L IBA的激素配比中,大量的愈伤组织出现嫩绿色的芽点,部分产生丛生芽,不定芽最高诱导率为75%;在1.0 mg/L TDZ和0.2 mg/L IAA的激素配比中,能促进分化出的不定芽继续良好生长,继代30 d,每个不定芽可分化3~4个枝条,枝条高度可达5 cm,最佳品种是‘WF19’;0.3 mg/L IBA诱导生根率最高,最高为88.35%,生成的根长约9 cm;开瓶时间为36 h时,幼苗生长良好,移栽成活率为73.33%,显著高于其他开瓶时间【结论】诱导愈伤组织形成的最佳培养基为:MS+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂;诱导不定芽形成的最佳培养基为:WPM+1 mg/L 6-BA+0.3 mg/LIBA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂;诱导不定芽增殖分化的培养基为:MS+1.0 mg/L TDZ+0.2 mg/L IAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂;诱导生根的最佳培养基为:1/2MS+0.3 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂。