摘要：根据已报道的禽流感病毒H5亚型HA1基因设计1对引物,利用RT-PCR技术扩增目的基因片段,将扩增片段插入到pPROEX-HTb表达载体上,并对重组表达质粒进行PCR酶切鉴定,通过序列测定验证读码框,并在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中进行表达.结果表明:扩增出的1 000bp的基因片段在大肠埃希氏菌中成功表达,蛋白产物约为38ku,经Western-blotting分析表明该融合蛋白具有很好的免疫原性.

摘要：为研究核苷二磷酸激酶B(nucleoside diphosphate kinase B,NDPK B)蛋白表达对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F48E9株复制与增殖的影响,本试验将真核表达重组质粒pEGFP-NDPK B转染Vero细胞,经G418压力筛选出了阳性细胞单克隆,并通过RT-PCR、Western blotting和倒置荧光显微镜观察鉴定了NDPK B mRNA和蛋白质的表达,在细胞系基础上,通过HA-HI、TCID50及实时荧光定量PCR检测NDPK B蛋白对NDV F48E9株复制和增殖的影响。结果表明,试验成功地构建了高表达NDPK B蛋白的Vero/NDPK B细胞系,并在此基础上,通过检测证明了NDPK B能抑制NDV F48E9株在Vero细胞中的复制与增殖,提示以NDPK B为基础有可能设计开发抗NDV的新药物或抗病毒增效剂,对NDV进行预防或治疗。

摘要：为快速准确检测小反刍兽疫病毒野毒和疫苗毒,建立一种特异性强、灵敏性高、经济实惠的实验室鉴别诊断方法,在同一反应体系内同时鉴别诊断小反刍兽疫野毒株和疫苗毒株用于应对该疫病诊断,使实验室检测工作更具有实效性。根据基因库中基因组序列设计2对特异性引物和探针,通过优化反应体系和扩增条件,建立能够同时检测并鉴别小反刍兽疫病毒(PPRV)野毒和疫苗毒的双重荧光RT-PCR检测方法。结果表明,建立的双重荧光RT-PCR可特异性检测小反刍兽疫野毒(FAM通道)和疫苗毒(TAMRA通道);敏感性实验表明,野毒(FAM通道)可检测到10^(-3)稀释度的RNA,疫苗毒(TAMRA通道)可检测到10^(-5)稀释度的RNA;用建立的二重荧光RT-PCR方法对20份样品进行检测,结果显示,该方法可以有效区分野毒和疫苗毒株,且检测结果与商品试剂盒检测结果一致,可用于临床检测。

摘要：为了解猪伪狂犬病毒（PRV）gE基因的遗传变异特性,根据Gen Bank已发表的PRV gE全基因序列,设计并合成1对特异性引物,对PRV YZ株进行了gE全基因的扩增、克隆及测序,并与其他参考毒株gE基因进行比较序列分析。测序结果表明,YZ株gE全基因序列由1862bp组成,与GenBank已发表的13株PRV gE参考株序列同源性介于97.9%-99.9%。进化树分析表明,YZ株与目前国内流行的毒株在同一进化分支内,与国外分离株有一定差异。