摘要：为建立土壤中黑胫病菌的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR快速检测方法,依据疫霉菌特异性par A1基因序列差异位点,设计1对特异性引物。通过构建含有目的片段的重组质粒,建立标准曲线,以SYBR GreenⅠ荧光染料法对烟草黑胫病菌进行荧光定量PCR检测,检测灵敏度达1×102个/g土壤,建立了基于SYBR GreenⅠ荧光染料法的荧光定量PCR的快速定量检测体系,并对云南、四川烟草主要栽培区土壤进行检测。表明该体系可以对烟草不同时期的田间土壤黑胫病菌的数量进行动态监测,可用于烟草黑胫病的预测和防治。

摘要：应用电镜观察和ELISA检测从云南11个县(市)烟草种植区采集的烟草上检测到番茄环纹斑点病毒(Tomato zonatespot virus,TZSV)。根据TZSV N基因设计引物扩增得到了31个TZSV分离物N基因全序列。测序分析表明,31个TZSVN基因核苷酸序列与GenBank中报道的序列相似性在94.9%～98%之间,其推导的氨基酸序列同源性为98.2%～99.3%。构建系统进化树发现云南不同地区的TZSV分离物存在一定差异。氨基酸序列比较发现,文山分离物和西畴分离物具有2个该地区独有的氨基酸位点。

摘要：烟草青枯病、黑胫病和猝倒病是烟草生产中的重要病害,常发生复合侵染。以3种重要烟草病原菌基因组DNA作为目的基因,分别设计3对特异性引物,通过优化引物和模板浓度,摸索扩增参数,建立了能同时检测3种病害的多重聚合酶链式反应(Multiplex polymerase chain reaction,mPCR)体系。结果表明,多重PCR能分别扩增出长度为461,364,265 bp的特异性目的条带,能同时检测3种病原菌DNA的最低检出限为1.01 ng/μL,该多重PCR检测体系反应准确、快速、高效,为同时检测以上3种烟草病害提供了新的方法,对烟草复合侵染病害的诊断和防治提供了重要的指导作用。

摘要：为了对不同来源的烟草黑胫病菌(Phytophora nicotianae)进行快速鉴定,设计并合成了一对特异性引物ITS8-1/ITS8-2,并与已经报道的特异性引物Pn1/Pn2和SP/AP对来自22个不同采样点烟草黑胫病菌DNA进行PCR扩增对比。结果发现特异性引物Pn1/Pn2和SP/AP对部分菌株不能扩增或扩增的条带较弱,而特异性引ITS8-1/ITS8-2则能扩增所有的供试菌株且扩增条带清晰,这表明该引物的特异性强于其他2对。用其他根茎病害病菌基因组DNA、烟草黑胫病组织和病土验证发现,引物ITS8-1/ITS8-2只能对烟草黑胫病菌、病组织、病土扩增出1条364 bp的特异性条带,与报道的***序列同源性为100%。证明该引物可适用于不同来源烟草黑胫病菌的鉴定、不同地点烟草黑胫病害的诊断。

摘要：根据烟草疫霉与其他疫霉菌ITS序列的差异设计了1对寡聚核苷酸引物,用于烟草疫霉的PCR检测。结果表明,在优化的反应体系与扩增条件下,该对引物表现出强特异性,只在烟草疫霉为模板的扩增体系中具有1条660 bp的条带。利用此特异性引物可稳定地从含有烟草疫霉的土壤及其发病组织中检测出病原菌。本实验提供并完善了一套快速检测烟草疫霉的方法和技术,特别对土传病害的准确诊断与快速检测在实践和理论上具有重要意义。

摘要：为创制双抗黑胫病(0号生理小种)和普通花叶病(TMV)的烟草种质,采用母本来源单倍体技术将Coker371和Coker176杂交后代F_1与烟属野生种非洲烟草(N. africana)杂交,经形态观察,结合流式细胞仪倍性鉴别,获得了母本来源的单倍体苗,并对分子标记辅助选择获得的目标单倍体进行叶脉培养加倍,创制了双抗黑胫病及TMV烤烟新种质RBST(Resistant to black shank and TMV)。苗期人工接种抗病鉴定、分子标记辅助检测和田间农艺性状鉴定表明,RBST的抗病性和农艺性状稳定,可用作烟草品种抗性定向改良的抗源材料。

摘要：烟草普通花叶病(TMV)是烟区的主要病害之一,生产上所用抗源都来自烟属的心叶烟(Nicotiana glutinosa),其携带N基因对TMV免疫,但因连锁累赘导致烟叶品质差,难以在生产上大面积使用。因此,从烟属植物中挖掘新的TMV抗源尤为必要。本研究以烤烟品种红花大金元与野生种圆锥烟草(***,PI 555550)为亲本,开展远缘杂交,获得了种间杂种。杂交种SSR、GISH及抗病性鉴定结果表明,杂交种含双亲特征条带,接种TMV后,叶片有枯斑反应。N基因特异引物在圆锥烟草及杂交种中未能扩增,而根据N基因同源基因Np片段设计的特异引物扩增到500 bp的片段,携带N基因的RBST及心叶烟草(*** PI 555507)中未扩增到此特异片段,在杂交种扩增到此特异片段。该研究为获得新的TMV抗源奠定了材料基础。