摘要：【目的】探索胚胎移植前供体牛与受体牛血浆外泌体miRNA的表达差异,以明确血浆外泌体miRNA在牛早期妊娠中的作用及其调控机制。【方法】以3~6岁、体重480~600 kg的夏南牛作为研究对象,选取10头供体牛进行同期发情、超数排卵和人工授精,23头受体牛只做同期发情处理。在人工授精后第7天,冲洗供体牛子宫以获取囊胚,选取3头囊胚数相近的供体牛及3头与供体牛体重和年龄均相近的受体牛,颈静脉采血,进行血浆外泌体的分离与鉴定;然后提取血浆外泌体miRNA,并检测其表达量;采用R语言中的DESeq差异算法计算P值,并筛选出P<0.05的miRNA,对差异表达的miRNA进行靶基因预测、GO功能富集分析和KEGG信号通路分析。【结果】6个样本的囊泡粒径均在135 nm左右,符合外泌体的特征。与供体牛相比,受体牛中有9个miRNAs表达显著上调(P<0.05),13个miRNAs显著下调(P<0.05);22个差异表达的miRNAs中,有15个miRNAs预测出无重复的靶基因2990个。GO功能富集分析和KEGG信号通路分析的结果表明,这些靶基因主要富集在与生物黏附(biological adhesion)、定位(localization)、细胞连接(cell junction)功能有关的通路上,显著富集的信号通路与黏着斑(focal adhesion)、黏着连接(adherens junction)有关,提示血浆外泌体miRNA可能参与调控胚胎着床。【结论】研究结果可为筛选和探究影响胚胎着床的血浆外泌体miRNA提供参考,并为进一步阐明血浆外泌体miRNA在母牛早期妊娠调控中的作用提供依据。

摘要：【目的】克隆郏县红牛DNA聚合酶β(DNA polymerase beta,POLB)基因,并对其进行生物信息学分析。【方法】以郏县红牛肌肉组织cDNA为模板,通过PCR方法克隆POLB基因完整CDS区序列;利用在线软件进行遗传距离分析并构建系统进化树,分析POLB蛋白的理化性质、疏水性、磷酸化位点、跨膜结构、信号肽、二级结构、三级结构和互作蛋白。【结果】郏县红牛POLB基因CDS区序列全长1008 bp,编码335个氨基酸。系统进化树分析表明,郏县红牛POLB基因氨基酸序列与绵羊等反刍动物的亲缘关系最近,与其他哺乳类动物和禽类次之,与斑马鱼(鱼类)最远。郏县红牛POLB蛋白分子质量为38.26 ku,理论等电点(pI)为9.10,半衰期为30 h,不稳定系数为31.06,总平均亲水系数为-0.659,属于稳定的亲水性蛋白;磷酸化位点预测分析发现,郏县红牛POLB蛋白包含17个丝氨酸磷酸化位点、12个苏氨酸磷酸化位点和4个酪氨酸磷酸化位点;跨膜区和信号肽预测结果显示,郏县红牛POLB蛋白不属于跨膜蛋白和分泌型蛋白;二级结构和三级结构预测发现,其主要包含α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲4种结构;在线软件预测结果表明,POLB蛋白与XRCC1、FEN1、PARP1和LIG3等为互作蛋白。【结论】本研究成功克隆了郏县红牛POLB基因CDS序列,其与绵羊亲缘关系最近;POLB蛋白为无跨膜结构、无信号肽的亲水性蛋白,与XRCC1蛋白互作程度最高,结果可为进一步探究POLB基因生物学功能提供参考。

摘要：牛嵴病毒(bovine kobuvirus,BKoV)是与犊牛腹泻密切相关的病原,试验针对BKoV 3D基因设计特异性引物和探针,建立快速检测BKoV的实验室方法。该方法仅能特异性扩增BKoV,对其他犊牛腹泻病原无扩增,特异性较强;对BKoV质粒标准品的最低检出限为11.0拷贝/μL,灵敏性较强;且组内与组间变异系数均小于2%,重复性较好。对采集自河南省的221份犊牛腹泻临床样本进行检测,BKoV的核酸检出率为9.05%(20/221)。本研究建立的检测方法为BKoV的临床快速检测和流行病学调查提供了有效手段。

摘要：为探究与牛繁殖性状相关的候选基因组区域和候选基因,采集97头郏县红牛和32头中国荷斯坦奶牛母牛血样并提取基因组DNA,利用简化基因组测序(SLAF-seq)技术获得了其全基因组SNP标记及个体基因型。通过计算各SNP位点的遗传分化系数(Fst)和核苷酸多态性(πratio),利用选择性清除方法筛选2个品种间差异的基因组区域,并与动物QTL数据库中牛繁殖性状相关QTLs进行比对,将重合区域作为候选区域。在Animal Omics Database数据库中查看候选区域内基因在母牛繁殖相关组织中的表达情况,将表达量高(FPKM>10)的基因优先作为候选基因。结果显示,根据Fst值和πratio值的99%分位数(Fst>0.390,πratio>1.49)筛选得到了42个品种间高度差异的基因组区域,其中11个基因组区域与繁殖性状QTL重合。其中,9个基因在卵巢、输卵管壶腹部或黄体中表达(FPKM>1)。CFDP1、CFDP2和FAM204A基因在各组织中均高表达(FPKM>10)。以上结果提示,CFDP1、CFDP2和FAM204A基因可优先作为牛繁殖性状相关候选基因。

摘要：旨在探究安格斯牛生长相关的受选择基因,为肉牛生长相关主效基因的鉴定提供参考。本试验共采集72头南阳牛母牛和14头黑安格斯牛母牛血样并提取基因组DNA。利用SLAF-seq(specific-locus amplified fragment sequencing)技术获得全基因组SNP标记并对试验个体基因型进行分型。通过计算各SNP位点的遗传分化系数(Fst值)和核苷酸多态性(πratio)筛选两品种间的差异基因组区域,并与动物QTL数据库中牛生长性状QTLs进行比对,重合区域作为候选区域。随后对候选区域内基因进行功能注释以筛选候选基因,并根据"Expression Atlas"数据库对候选基因的组织表达情况进行分析。经筛选后,本试验共得到69762个SNPs,以Fst值和πratio值的99%分位数为阈值筛选得到33个两品种间高度差异的基因组区域,其中16个基因组区域与生长性状相关QTLs重合。这些区域共包含27个基因,其中4个基因(FXR1、ADAR、IGF1和MNF1)与骨生长、肌肉发育和生长调控有关。FXR1和MNF1均在骨骼肌组织中高表达,ADAR和IGF1分别在脑组织和肝脏中表达最高。结果提示,IGF1基因可作为影响肉牛生长的关键候选基因,FXR1、ADAR、MNF1基因可优先进行进一步验证研究。

摘要：本文旨在研究复方中草药添加剂对热应激奶牛干物质采食量、泌乳性能和血液生化指标的影响。试验挑选60头体况、产奶量、泌乳日龄和胎次相近的荷斯坦奶牛,采用完全随机试验设计,随机分为4组,每组15头奶牛,每组分别在基础饲粮中添加0、100、200和300 g/头·d的复方中草药添加剂,预饲期1周,正试期8周。结果表明,200和300 g/头·d添加组奶牛的干物质采食量和产奶量显著高于0和100 g/头·d添加组奶牛(P0.05)。复方中草药添加剂显著提高了热应激奶牛血液甲状腺激素和皮质醇浓度(P<0.05),其中以200 g/头·d添加组浓度最高。复方中草药添加剂显著提高了热应激奶牛血液超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性,降低了血液丙二醛含量。综上所述,本试验条件下使用的复方中草药添加剂以200 g/头·d的添加剂量具有最佳效果,可以显著改善热应激奶牛的干物质采食量和泌乳性能。

摘要：健康养殖是针对我国畜牧业的现状和特点设计的一种具有以畜为本、动物福利观念的养殖概念。文章介绍了健康养殖的意义，从遗传育种、动物营养、疾病防治及重大疫病监测、环境工程几方面重点阐述了其关键技术措施，最后分析其经济效益情况。

摘要：为研究促排卵3号在小尾寒羊超数排卵中的最佳使用剂量,对30头小尾寒羊分为3组进行超排,供体发情后,设计不同剂量促排卵3号和对照组,对比其排卵效果。结果显示,第1组使用25μg的LHRH-A3排卵率为58.92%,第2组使用50μg的LHRH-A3排卵率为92.3%,对照组排卵率为37.5%。结论:使用50μg促排卵3号能提高小尾寒羊超排中的排卵率。

摘要：牛嵴病毒(BKoV)可能是与犊牛腹泻相关的潜在病原,为建立快速检测BKoV的方法,本研究根据BKoV 3D基因的保守序列,设计特异性引物对,通过优化反应条件和体系,建立了基于EvaGreen染料检测BKoV的实时定量PCR方法。该方法Ct值与模板在1.08×10^(2)~1.08×10^(8) copies/μL范围内线性关系良好,扩增效率为106.4%;该方法仅检测BKoV时结果呈阳性,检测其他犊牛腹泻相关病原时结果呈阴性;能检出BKoV的最低检出限为10.8 copies/μL;批内和批间的变异系数均小于2%,重复性好。用该方法对311份采自河南、山东和四川省的犊牛腹泻样本进行检测,河南省BKoV的检出率为7.38%(20/271),其他两省的样本均未检测出BKoV。本研究建立的方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,为BKoV的检测和流行病学调查提供了有力手段。

摘要：为了给双肌肉牛品种的培育提供新的遗传素材,拟利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎。从采集到的86对牛卵巢中收集卵母细胞进行成熟培养以及体外受精,并使用在线软件设计能够在体外高效编辑牛MSTN基因的gRNA序列,将验证后所得的体外切割活性最高的gRNA与Cas9 mRNA的混合物显微注射牛的受精卵,培养至囊胚后,利用T7EI核酸内切酶法检测囊胚中MSTN基因的编辑情况,然后将基因编辑阳性的囊胚样品进行测序验证。结果表明,牛胚胎体外培养平均囊胚率为21.28%;在设计的多条gRNA序列中,gRNA5的体外切割活性最高,为96.00%;将Cas9 mRNA和gRNA5的混合物显微注射受精卵并培养至囊胚后,T7EI核酸内切酶检测表明囊胚MSTN基因切割阳性率为15.40%;对MSTN基因编辑囊胚阳性样品测序表明,在gRNA5靶位点存在部分片段缺失。综上,说明利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功获得了牛MSTN基因编辑胚胎。