摘要：目的分析强直性脊柱炎股骨近段的形态学改变并以之为基础指导强直性脊柱炎的全髋关节置换术的假体选择。方法 将24例(36髋) 强直性脊柱炎患者设为强直性脊柱炎(AS)组, 所纳入患者术前已出现关节强直, 并进行非骨水泥人工全髋关节置换术。对照组共30例(45髋) , 均系非强直性脊柱炎患者并且进行非骨水泥型全髋关节置换术。分析两组患者术前髋关节正侧位片, 并且测量Singh指数、髓腔张开指数、皮质形态指数和皮质骨指数, 分析两组患者术后 X线片, 测量股骨假体的髓腔占有率。并且进行组间计量资料t检验, 对髓腔占有率和Singh指数进行Spearman等级相关分析。结果 两组间在Singh指数、髓腔张开指数、皮质形态指数以及假体髓腔占有率方面存在显著性差异(P0.05)。强直性脊柱炎患者的股骨近段出现比较显著的骨质疏松以及形态学改变,髓腔形态更接近于直立, 髓腔开口处张口角度更大, 骨皮质变薄。结论 在没有定制型假体的情况下, 对于由于严重骨质疏松所造成的股骨近段髓腔形态呈现烟囱型改变的强直性脊柱炎患者, 可以选用传统水泥型假体并且应当按照关节翻修术来处理; 对于对髓腔形态没有出现显著改变的强直性脊柱炎患者仍然可以选用传统生物固定型假体; 由于其年龄较轻预期生存时间较长, 对THA术后髋关节功能期望值较高, 根据患者髓腔形态利用计算机辅助设计技术制备特殊设计的个体化水泥型假体应比现有类型假体更加适合强直性脊柱炎患者。

摘要：背景:β-磷酸三钙作为理想的骨替代材料己成为众多学者研究的重点之一,但与新生大鼠颅盖骨来源成骨细胞复合的研究较少。目的:评价多孔β-磷酸三钙支架与成骨细胞复合植入大鼠肌袋模型后的异位成骨能力。设计、时间及地点:同体对照动物实验,于2007-09/2008-10在西安交通大学医学院中心实验室和实验医学动物中心完成。材料:新生SD大鼠2只,12周龄SD大鼠20只。多孔β-磷酸三钙购自上海贝奥路公司,大小为5mm×5mm×5mm。方法:应用扫描电镜观察β-磷酸三钙结构特点。成骨细胞体外分离、培养,倒置显微镜下观察细胞生长情况。使用第3代细胞与β-磷酸三钙复合后,植入大鼠背部左侧肌袋,将β-磷酸三钙空白支架植入右侧肌袋。分别在植入1,4,8周后,将成骨细胞β-磷酸三钙复合物取出行苏木精-伊红染色观察新骨形成情况,并应用KS4003.0软件进行新骨生成分析。主要观察指标:①β-磷酸三钙结构特征。②成骨细胞生长情况。③组织学观察新骨生成情况。④图像分析新骨生成结果。结果:β-磷酸三钙孔径大小一般为(500±150)μm,孔内连接径(150±50)μm。倒置显微镜下观察成骨细胞呈三角形、多角形或梭形。植入1周后所有标本都未发现骨生成;在4,8周时成骨细胞复合β-磷酸三钙组新骨生成量均多于β-磷酸三钙组(P<0.05,0.01)。结论:多孔β-磷酸三钙复合成骨细胞支架在大鼠体内具有异位成骨能力。

摘要：背景:血管内皮生长因子能促进内皮细胞分裂增殖及血运重建,诱导血管生成,近年来以血管内皮生长因子为基础的基因治疗已逐步试用于临床。但质粒载体转染率低、腺病毒载体对机体的免疫原性及存在潜在感染危险等问题尚需探讨。目的:拟构建带有绿色荧光蛋白标记并携带hVEGF165基因的无致病性重组腺相关病毒,鉴定并测定病毒滴度及活性。设计、时间和地点:开放性实验,于2007-03/09在陕西省疾病预防控制中心病毒室完成。材料:病毒包装细胞AAV-293、病毒滴度检测细胞AAV-HT1080购自Stratagene公司;EcoliDH5α菌株由陕西省疾病预防控制中心保存;AAVhelper-freesystem腺相关病毒包装系统中pAAV-IRES-hrGFP质粒包含绿色荧光报告基因,购自Stratagene公司;重组携带hVEGF165基因的质粒pUC18-hVEGF165由西安交通大学第二医院骨科时志斌博士构建。方法:从含有hVEGF165基因的pUC18-hVEGF165质粒中扩增出hVEGF165片段,插入腺相关病毒骨架质粒pAAV-IRES-hrGFP,构建重组骨架质粒pAAV-hVEGF165-IRES-hrGFP。将此重组质粒和腺相关病毒包装质粒pAAV-RC、辅助质粒pAAV-Helper磷酸钙法共转染AAV-293细胞,通过同源重组产生重组腺相关病毒rAAV-hVEGF165-GFP。荧光显微镜下监测病毒包装效率,裂解AAV-293细胞收获重组病毒并进行浓缩纯化。应用该重组病毒感染AAV-HT1080细胞,荧光计数法测定病毒滴度,并通过病毒基因组外源基因hVEGF165扩增鉴定重组病毒的包装是否成功。应用该重组病毒感染AAV-HT1080细胞。主要观察指标:荧光显微镜下监测病毒包装效率。荧光计数法测定病毒滴度,并通过病毒基因组外源基因hVEGF165扩增鉴定重组病毒的包装是否成功。结果:扩增产物经DNA测序确定为hVEGF165cDNA片段,重组骨架质粒pAAV-hVEGF165-IRES-hrGFP经双酶切鉴定正确。病毒包装效率达95%以上,收获纯化病毒滴度达5.5×1011vg/mL。提取重组病毒基因组成功扩增出外源目的基因片段hVEGF165,证实重组病毒rAAV-VEGF165-GFP包装成功。结论:成功构建带有绿色荧光蛋白标记并携带hVEGF165基因的无致病性重组腺相关病毒rAAV-VEGF165-GFP,收获的病毒具有较高滴度和感染活性。

摘要：背景:目前用于基因治疗的病毒载体对机体具有一定免疫原性,且存在潜在感染危险,限制了临床的应用。目的:拟构建带有绿色荧光蛋白标记并携带hVEGF165基因的无致病性重组腺相关病毒,以其作为基因载体感染兔骨髓基质干细胞,体外检测病毒生物学活性及功能。设计、时间和地点:开放性实验,于2007-03/11在陕西省疾病预防控制中心病毒室完成。材料:兔骨髓基质干细胞由试验者原代培养,取自成年新西兰大白兔;人脐静脉内皮细胞取自健康产妇婴儿脐带,产妇对本实验知情同意。方法:从含有hVEGF165基因的pUC18-hVEGF165质粒中扩增出hVEGF165片段,构建重组骨架质粒pAAV-hVEGF165-IRES-hrGFP。将此质粒和腺相关病毒包装质粒pAAV-RC、辅助质粒pAAV-Helper共转染AAV-293细胞,通过同源重组产生重组腺相关病毒rAAV-hVEGF165-GFP。应用该重组病毒感染体外培养的兔骨髓基质干细胞主要观察指标:荧光显微镜下监测病毒包装效率,感染AAV-HT1080测定病毒滴度,并通过病毒基因组外源基因扩增鉴定重组病毒的包装是否成功。检测重组病毒的感染效率。ELISA法检测培养上清中血管内皮生长因子含量,人脐静脉内皮细胞管状血管形成试验检测血管内皮生长因子蛋白活性。结果:扩增产物经DNA测序确定为hVEGF165cDNA片段,重组骨架质粒pAAV-hVEGF165-IRES-hrGFP经双酶切鉴定正确。病毒包装效率达95%以上,收获纯化病毒滴度达5.5×1011vg/mL。提取重组病毒基因组成功扩增出外源目的基因片段,证实重组病毒rAAV-VEGF165-GFP包装成功。重组病毒rAAV-VEGF165-GFP感染骨髓基质干细胞效率为40%,感染72h后骨髓基质干细胞中血管内皮生长因子含量达(85.58±5.37)μg/L,分泌的血管内皮生长因子蛋白可以使人脐静脉内皮细胞拉长变形、出芽且相互交联成管状样结构。结论:成功构建带有绿色荧光蛋白标记并携带hVEGF165基因的无致病性重组腺相关病毒rAAV-VEGF165-GFP,该重组病毒能够高效感染兔骨髓基质干细胞并表达血管内皮生长因子,分泌的血管内皮生长因子蛋白具有良好的生物活性,可有效促进人脐静脉内皮细胞的增殖。

摘要：目的:构建含人骨形态发生蛋白2(hBMP2)基因的重组腺相关病毒载体。方法:根据hBMP-2基因序列设计引物,上游引入SalI酶切位点,下游引入EcoRI酶切位点,以胚胎骨髓组织总RNA为模版进行rt-PCR反应扩增hBMP-2基因。将hBMP-2片段定向亚克隆进pAAV-IRES-GFP的MCS中,获得重组表达质粒(pAAV-hBMP2-IRES-GFP),采用磷酸钙沉淀法将该质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper共同转染到AAV293细胞,进行rAAV-hBMP2-IRES-GFP重组病毒包装。收获的病毒液按氯仿处理、PEG/NaCl沉淀、氯仿反复抽提法浓缩纯化,采用荧光计数法测定重组病毒感染滴度。结果:酶切鉴定、测序结果表明,hBMP2成功克隆入pAAV-IRES-GFP载体中。在AAV293细胞中包装出重组腺相关病毒载体的感染滴度为3.6×1011/ml。结论:成功制备了rAAV-hBMP2载体,可满足骨组织工程的需要。

摘要：目的　研究横杆对不同类型椎弓根螺钉器械稳定性的影响程度。方法　AF、Dick、VSP钢板三类椎弓根螺钉器械被安装在加载模型上 ,分别在 0、1、2个横杆状态下施加旋转扭矩 ,加载负荷为 2Nm、5Nm、8Nm ,记录不同负荷下的角位移 ,结果行成组设计资料t检验。结果　在 2Nm扭矩下 ,VSP与Dick组加用横杆角位移减少较小 (P >0 .0 5 ) ,AF组的角位移减少较多 (P <0 .0 5 )。在 5Nm、8Nm扭矩下 ,加用横杆后各型器械的稳定性明显增加 (P <0 .0 5 ) ,加用 2个横杆的角位移较 1个横杆的角位移明显减少 (P <0 .0 5 )。结论　横杆可以提高椎弓根螺钉器械的稳定性 ,加用 2个横杆效果优于加用 1个横杆 ;

摘要：目的 :设计制作静脉回流受阻Legg Perthes病动物模型 ,并对其进行观察评价。方法 :选择健康杂种幼犬2 0只 ,雌雄不拘。采用自身对照方法 ,一侧髋用来实验 ,一侧髋作为对照。应用套针经皮于大转子下方穿入股骨颈中央达股骨头颈部骺板远侧 ,注入lml医用TH胶。于实验不同时期行骨骺骨内压、X线、CT检查 ,组织标本行常规病理检查。结果 :实验制作了影像及组织病理变化类似于人类Legg Perthes病的动物模型。结论 :此模型设计合理 ,制作方法简单 。

摘要：背景:目前血管内皮细胞生长因子制备困难,来源有限,限制了临床的应用。目的:用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子165,分离纯化并检测其免疫学以及生物学活性。为后期构建携带血管内皮生长因子165蛋白的预成血管化组织工程骨提供了充足的蛋白来源。设计、时间及地点:开放性实验,单一样本观察,于2005-04/2007-01在陕西省疾病预防控制中心病毒室完成。材料:携带目的基因血管内皮生长因子165的克隆质粒PUC18-VEGF165由西安交通大学第二医院时志斌博士构建,PGEM-Teasy质粒购自美国Promerga公司,原核表达质粒购自德国Qiagen公司,DH5α、M15、JM109菌株由陕西省疾病预防控制中心病毒研究室保存。方法:利用聚合酶链反应亚克隆的方法获得目的基因片段,构建表达质粒pQE30-VEGF165,在大肠杆菌JM109中用IPTG进行诱导表达并使用Ni2+-NTA进行蛋白纯化。经过纯化获得了血管内皮生长因子165蛋白。主要观察指标:①人血管内皮生长因子165基因的亚克隆结果。②重组表达载体pQE30-hVEGF165的鉴定结果。③人血管内皮生长因子165蛋白的诱导表达、纯化。④使用ELISA和Westernblot技术检测人血管内皮生长因子165蛋白免疫学活性。⑤鸡胚尿囊绒毛膜试验和matrigel血管形成实验检测其生物学活性。结果:重组表达质粒pQE30-VEGF165在大肠杆菌中成功地表达了相对分子质量为23000的蛋白,其以不溶性的包涵体形式存在,占菌体蛋白的30%左右,经过分离和Ni柱纯化获得了血管内皮生长因子165蛋白,浓度约为0.2g/L,ELISA和Western blot实验显示其具有良好的免疫学活性,鸡胚尿囊绒毛膜试验和matrigel血管形成实验显示表达蛋白具有良好的生物学活性。结论:实验在原核细胞中稳定、高效表达了具有活性的血管内皮生长因子165蛋白,为后期预构血管化组织工程骨的构建提供了充足的蛋白来源。

摘要：目的探讨强直性脊柱炎患者行全髋关节置换术时的假体选择方法。方法将24例(36髋)强直性脊柱炎患者设为强直性脊柱炎(AS)组,所有纳入患者术前均已出现关节强直,并进行了非骨水泥人工全髋关节置换术。对照组共30例(45髋),均系非强直性脊柱炎患者并且进行非骨水泥型全髋关节置换术。分析两组患者术前髋关节正侧位片,并且测量singh指数、髓腔张开指数、皮质形态指数和皮质骨指数,分析两组患者术后X线片,测量股骨假体的髓腔占有率,进行组间计量资料t检验,对髓腔占有率和Singh指数进行Spearman等级相关分析。结果两组间在singh指数、髓腔张开指数、皮质形态指数以及假体髓腔占有率方面存在显著性差异(P0.05)。强直性脊柱炎患者的股骨近段出现比较显著的骨质疏松以及形态学改变,髓腔形态更接近于直立,髓腔开口处张口角度更大,骨皮质变薄。结论在没有定制型假体的情况下,对于由于强直性脊柱炎严重骨质疏松所造成的股骨近段髓腔形态呈现烟囱型改变的患者,应该选用传统水泥型假体并按照关节翻修术的方法来处理;对于髓腔形态没有出现显著改变的强直性脊柱炎患者仍可选用传统生物固定型假体;根据患者髓腔形态利用CAD技术特殊设计的个体化水泥型假体应比现有类型假体更加适合强直性脊柱炎患者。

摘要：目的:对自行设计的颈椎内固定器——钛板-融合固定器进行生物力学研究,评价其临床应用的可能性。方法:将钛板-融合固定器固定的脊柱功能单位进行前屈、后伸、扭转、侧弯等力学测试,并与单钝钛板固定和单纯融合器固定作对比。结果:单纯融合器固定在后伸时力学性能差;钛板固定在扭转试验时力学性能差;钛板-融合固定器在各方向力学性能都较前两者好。结论:单纯融合器固定和单纯钛板固定都存在生物力学上的薄弱点,钛板-融合固定器可结合前二者的优点,更适应临床颈椎病患者治疗的力学需要。