摘要：目的调查国内实验恒河猴和食蟹猴中幽门螺杆菌和"猕猴螺杆菌"的感染情况。方法参考文献中的螺杆菌属16S rRNA和幽门螺杆菌16S rRNA的引物序列,和新设计的"猕猴螺杆菌"16S rRNA特异性引物,在人工养殖的45只成年恒河猴和90只成年食蟹猴粪便样本中,通过q PCR或常规PCR检测来初步调查这两种猕猴中两种螺杆菌的感染情况。结果在恒河猴中幽门螺杆菌和"猕猴螺杆菌"的感染率均为100%,在食蟹猴中幽门螺杆菌和"猕猴螺杆菌"的感染率分别为100%和97.8%。结论证实我国人工繁育饲养的恒河猴和食蟹猴普遍存在"猕猴螺杆菌"感染。幽门螺杆菌和"猕猴螺杆菌"几乎同时存在于所有人工繁育的实验猴个体中,可能会对这两种猕猴的健康以及相关动物实验结果的准确性存在不利影响。

摘要：目的探索核酸检测在日本血吸虫病诊断中的应用。方法根据日本血吸虫基因设计特异性引物,采用PCR方法对日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便、外周血清标本中的DNA进行扩增,并将虫卵和粪便的模板DNA倍比稀释后进行扩增,以测定PCR扩增法的敏感性。结果从日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便和外周血清中均扩增到分子量为230bp的阳性条带,扩增产物经测序并在基因库中匹配,证实为日本血吸虫基因中的一个片段,其同源性为98%。其PCR扩增敏感性检测结果表明,0.021个虫卵DNA模板即可扩增出该特异性阳性条带。结论聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA有较高的敏感性,尤其是能从日本血吸虫感染宿主血清中检测出特异性DNA,具有潜在的诊断应用价值。

摘要：通过BLAST比较已公布的鸭坦布苏病毒核酸序列,在其E基因保守区域设计了4对引物,并用鸭坦布苏病毒培养物核酸筛选出最佳的一对引物建立了SYBR Green qPCR。用构建的重组质粒建立标准曲线,扩增效率为90.5%,在2.0×10~1~2.0×10~8copies/μL范围内具有良好的线性关系,最低检测限为100拷贝/反应。该qPCR方法可以检测5个鸭坦布苏病毒分离株以及WF100活疫苗,灵敏性比文献已发表的其他3对引物高10倍;且特异性很好,不与其他常见禽类病毒交叉反应。由此表明本研究新建了一种高度灵敏和特异的鸭坦布苏病毒的SYBR Green qPCR检测方法。

摘要：目的建立寨卡病毒的实时定量PCR(qPCR)检测方法。方法比较公布的寨卡病毒核酸序列,在保守区域NS5设计引物,用重组质粒建立标准曲线分析建立的qPCR方法的扩增效率和线性范围,用6个寨卡病毒分离株及登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒、乙脑病毒等其他黄病毒核酸进行灵敏性和特异性分析,并与3对已公布的寨卡病毒引物进行比较。结果针对寨卡病毒NS5基因设计了1对引物并建立了SYBR Green q PCR方法,以重组质粒为模板的扩增效率为89.3%,在2.0×10^1~2.0×10^8拷贝/μl范围内线性关系良好,最低可检测到100拷贝/反应。以ZIKV GD01株核酸为模板时,该方法可稳定检测到3.48×10^-4ng/μl RNA,与两对已公布的引物敏感性相同,比另1对引物敏感性高10倍。5个模板浓度梯度各3次重复检测的变异系数为0.06%~0.62%。该方法可以检出6株非洲型和亚洲型寨卡病毒,且与其他4种黄病毒无交叉反应。结论建立了寨卡病毒SYBR Green qPCR检测方法。该方法灵敏性高、特异性强、重复性好,为口岸提供了技术手段和技术支撑。