摘要：采用阳离子交换层析、RP-FPLC及RP-HPLC分离纯化技术,从细菌诱导的桔小实蝇蛹中分离鉴定出桔小实蝇抗菌肽Bactrocerin-1的同系物Bactrocerin-2。结果表明:Bactrocerin-2含有20个氨基酸残基,分子量为2 311.51 u,序列为VTKTWIKVIRGIGKSKIKWA;并且Bactrocerin-2与Bactrocerin-1的相似性极高,氨基酸同源性达到90%;该肽与鞘翅目Coleoptericin C-末端的20个氨基酸也具有较高的相似性。氨基酸组成分析结果表明,该肽是一种疏水、带正电荷的抗菌肽。该研究将有助于对昆虫天然免疫反应的认知,并为设计有效的抗菌分子奠定基础。

摘要：桑树病毒病一直是影响蚕桑产业发展的重要因素之一,但其病原也尚未完全确认。本研究收集全国不同桑园、不同时间和不同品种的皱缩状和花叶状桑叶样品,分离病毒后使用透射电子显微镜观察病毒形态特征。结果在桑病叶中分离获得两种病毒,一种为双联体形态病毒,长(27.84±1.71)nm,宽(17.05±1.13)nm,形态特征与双生病毒属的病毒形态特征一致;另一种为球状体病毒(80~100 nm),形态特征与番茄斑萎病毒属的病毒形态特征一致;桑叶切片观察,发现同一桑叶材料中存在这两种病毒。通过高通量测序发现其存在桑花叶型萎缩病相关病毒Mulberry mosaic dwarf associated virus(MMDaV)和桑脉带相关病毒Mulberry vein banding associated virus(MVBaV)。设计上述病毒的特异引物,对158份桑病叶进行PCR检测,MMDaV的检出率为93.04%;而MVBaV为60.13%,同时检出率为57.59%。结果表明,MMDaV和MVBaV在桑病叶中普遍存在,且同时存在。本研究首次在桑树病叶中同时观察并检测到MMDaV和MVBaV,二者在桑皱缩状和花叶状的桑叶中存在混合感染的现象,研究结果将为今后深入研究桑病毒病及防控奠定了基础。

摘要：桑源阴沟肠杆菌是引起桑树发生枯萎症状的重要病原之一。对桑源阴沟肠杆菌全基因组序列进行分析,得到桑源阴沟肠杆菌特异基因序列,并以该特异基因序列为靶序列,设计筛选合适的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)引物组,通过荧光扩增曲线法、PCR产物琼脂糖凝胶电泳法及PCR产物SYBR Green Ⅰ染色法3种判定方法优化反应体系,进而建立桑源阴沟肠杆菌LAMP检测技术和产品。采用Yt4引物组,在60℃、外内引物浓度比为1∶10的最优反应条件下,桑源阴沟肠杆菌阳性质粒检测灵敏度为25×10^6拷贝/μL。在特异性实验中,桑源阴沟肠杆菌菌株的阳性反应能产生S型荧光扩增曲线,电泳法可得到梯形条带,染色法反应液变为绿色,而在其他供试菌株及阴性对照中均未发生这些现象。应用建立的LAMP检测法和普通PCR方法分别对来自4个不同地区的11个桑树枯萎症状样品进行同步平行检测,2种方法的检测结果一致,但LAMP检测法更简单、快捷和灵敏。建立的桑源阴沟肠杆菌LAMP检测方法,为桑源阴沟肠杆菌的快速检测及桑树枯萎病的诊断提供了新技术。