摘要：背景:核基质附着区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列,不仅可影响邻近内源基因的表达,还能克服转基因沉默,提高外源基因的转录与表达。目的:探讨在CHO细胞中β-干扰素核基质附着区对氯霉素乙酰转移酶转基因表达的影响。设计、时间及地点:开放性实验,于2006-10/2007-04在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成。材料:CHO细胞株由中国典型培养物保藏中心提供。含氯霉素乙酰转移酶报告基因及G418筛选标记的质粒pCATG载体由本实验室构建。方法:将PCR扩增得到的人β-干扰素核基质附着区分别用SacI/KpnI及BamHI/SalI酶切,连接至用相应内切酶酶切的pCATG载体上,转化***109,提取质粒行酶切电泳,将构建好的载体命名为pCAT-MAR,该载体含氯霉素乙酰转移酶报告基因表达盒及两侧的β-干扰素核基质附着区。分别用载体pCATG及pCAT-MAR转化CHO细胞,提取具有G418抗性的细胞株基因组DNA,PCR扩增氯霉素乙酰转移酶基因。主要观察指标:ELISA法分析氯霉素乙酰转移酶报告基因的表达。PCR法检测pCAT-MAR载体是否稳定整合在宿主基因组上。结果:①pCATG转化的CHO细胞共筛选出16个阳性细胞株,pCAT-MAR转化的CHO细胞筛选出17个阳性细胞株。β-干扰素核基质附着区可使氯霉素乙酰转移酶报告基因表达水平提高2.8倍,pCATG转化CHO细胞的变异系数为2.0650,pCAT-MAR转化CHO细胞的变异系数仅为0.8131。②稳定转化的细胞株基因组DNA均扩增出437bp目的片段,证明pCAT-MAR载体已经稳定整合到基因组上。结论:β-干扰素核基质附着区能提高转基因在CHO细胞的表达水平,并且可降低不同转化细胞株之间转基因表达的差异性。

摘要：根据克隆的杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因.经原核表达、Ni2+亲和层析法纯化,免疫动物制备抗体.抗体蛋白质印迹分析检测结果表明抗体能特异结合盐藻细胞分子量为29 kD的多肽.

摘要：采用酚/氯仿抽提、乙醇沉淀提取人基因组DNA,根据GenBank报道的序列设计引物,PCR扩增人β-干扰素核基质结合区(matix at tachment region,MAR),琼脂糖凝胶电泳鉴定,连接T-载体,测序,分析其序列特征。结果显示PCR扩增出800bp条带,与预期片段大小相符。测序结果显示克隆的片段序列和报道的序列同源性为97%,克隆的DNA片段具备典型的MAR特征。结果显示我们成功从人基因组克隆了人β-干扰素MAR序列。

摘要：研究目的探讨肝硬化腹水患者与血浆心房利钠尿肽含量的关系。研究设计用放射免疫测定法检测8例肝硬化腹水患者和10例正常人血浆及心房利钠尿肽水平,井进行统计学处理。研究单位生物化学研究室研究对象肝硬化腹水患者8例,男7例,女1例;年龄38～67岁,平均59岁。正常健康人10例;男8例,女2例,平均年龄31岁。处理方法被检查者空腹,抽静脉血3ml,置于含10％EDTA-Na_2 30μl和抑肽酶50μl的玻璃管中混匀。4℃3 000rpm离心10min,取血浆分装两管,-20℃以下保存待测。测定结果放射免疫测定法检测。8例肝硬化腹水患者和10例正常人血浆心房利钠尿肽水平分别为863.7±98.5pg/ml和354.5±39.2pg/ml(P<0.001)。结论肝硬化腹水患者血浆心房利钠尿肽水平明显升高。