摘要：目的探索一种可同时检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的肠杆菌科细菌与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的多重降落PCR方法。方法收集某院20l3年3月—2014年9月102份住院患者血培养阳性标本,针对产ESBLs肠杆菌科细菌的SHV、TEM、OXA基因和MRSA的MecA基因设计4对特异性引物,分别采用单一降落PCR和多重降落PCR对各耐药基因进行扩增,并将结果与药敏纸片法进行比较。结果各单一PCR均可扩增出特异性条带,并用多重降落PCR同时检测了4种耐药基因;建立的多重降落PCR对4种耐药基因(MecA、SHV、TEM、OXA)DNA的检测下限分别为4.37、2.19、4.53和3.59 ng。与药敏纸片法相比,多重降落PCR总灵敏度与特异性分别为100.00%、88.24%,检测ESBLs的灵敏度达100.00%,特异性为87.23%,检测MRSA的灵敏度和特异度均为100.00%。结论该实验建立的多重降落PCR具有高灵敏度与特异性,可用于产ESBLs肠杆菌科细菌和MRSA所致血流感染的快速诊断与流行病学调查,有利于指导临床使用抗菌药物。

摘要：温度控制(温控)系统是全自动化学发光免疫分析仪最重要的子系统之一,可保证检测过程中样本和试剂的质量,并为反应液提供适宜温度环境,使化学反应更充分,从而获得可靠的检测数据。本文介绍一种用于AutolumiS 3000型全自动微粒子化学发光分析仪的温控系统,该系统根据样本的检测需求,采用恒温空气干浴方式通过多个独立温控模块对温度进行调控,改善了控制系统的性能,避免了因温度变异引起的结果异常。该系统孵育区与测量区温度可分别精确控制在(37.0±0.5)℃和(33.0±1.0)℃,试剂区可保持在8~12℃,在临床应用中表现出良好的稳定性和高控制精度。

摘要：目的表达并鉴定一种用于检测1型糖尿病的抗原蛋白质,探讨其在化学发光检测系统中的临床应用。方法利用Primer 5.0软件设计引物,扩增谷氨酸脱羧酶65(GAD65)的部分蛋白质编码区(CDS)并克隆至pFastBac1载体中,经测序验证后在SF9细胞中表达。采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定所得蛋白。利用该蛋白制备一种用于1型糖尿病检测的试剂盒,将其运用于化学发光检测系统,计算阳性检出率,并比较化学发光检测系统与蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)阳性检出率的差异。结果成功表达了与GAD65抗体特异结合的抗原蛋白质,SDS-PAGE显示其相对分子质量为65000,与预测值相符;亲和层析纯化后蛋白纯度≥95%。所制备的化学发光检测试剂盒的阳性检出率明显高于Western blotting〔78.95%(30/38)比52.63%(20/38),P<0.05〕。结论GAD65抗体特异结合抗原蛋白纯度高、特异性强,利用该蛋白制备的相应试剂盒可应用于化学发光检测系统,提高了GAD65抗体的阳性检出率和对1型糖尿病的诊断效率,避免传统检测方法的漏检,值得在临床推广。