摘要：参考GenBank中各个血清型口蹄疫病毒3D、vp1、2A基因的标准序列,设计引物P1/P2和S1/S2。建立用于检测口蹄疫病毒及其利用引物S1/S2克隆片段同源性比较而确定血清型的RT-PCR方法。通过敏感性试验检测,2对引物均可以检测到10 TCID_(50)的病毒量;特异性试验的检测,2对引物对正常细胞、牛黏膜病病毒、猪瘟病毒、水疱性口炎病毒、牛传染性鼻气管炎病毒的检测结果均为阴性。利用该方法对病牛的流涎液体、水疱液体、舌皮组织、感染犊牛心脏等组织进行检测初步结果显示:该方法可以对O型和AsiaⅠ型口蹄疫病毒进行特异性检测,能够用于口蹄疫急性及亚临床感染的诊断及流行病学调查。

摘要：为建立同时检测猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)经典株和高致病性株(HP-PRRSV)的多重RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的PRRSV经典株、HP-PRRSV株和CSFV基因组全序列,分别设计了2对特异性引物PRRSV-S/PRRSV-A和CSFV-S/CSFV-A,产物分别为544 bp、457 bp和294 bp。检测结果显示,该方法具有高特异性,均可检测到1 TCID50的病毒量。对65份临床上疑似为CSFV和PRRSV感染的病料样品进行检测的结果表明,本研究建立的多重RT-PCR检测方法可以用于临床上CSFV和PRRSV感染引起的传染病病原学的检测,并且能够准确鉴别PRRSV经典株及HP-PRRSV。

摘要：为了建立可同时检测猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的多重PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的PRV gE基因和PCV-2 ORF2基因的核苷酸序列,分别设计了2对特异性引物PRV-S/PRV-A和PCV-2-S/PCV-2-A,产物分别为270 bp和189 bp。检测结果显示,该方法具有较高特异性,检测PRV和PCV-2的DNA最低量均为1×10^(-4)μg/μL。对136份临床上疑似为PRV和PCV-2感染病料样品进行检测的结果表明,本研究建立的多重PCR检测方法可用于临床上PRV和PCV-2引起的单纯或混合感染的传染病病原学诊断。

摘要：设计分别检测鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)、鸭瘟病毒(duck plague virus,DPV)和鸭疫里默杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)的特异性引物,且PCR产物大小差异明显;优化多重PCR的引物浓度、退火温度,并分析特异性和敏感性;利用多重PCR方法和单一PCR方法对54份临床采集的鸭源病料进行检测。结果显示,该多重PCR检测方法可用于DTMUV、RA和DPV的单纯或混合感染的诊断,PCR产物大小分别为220,308,551 bp;反应体系中最佳引物终浓度组合为1.0μmol/L的引物DTMUV-S和DTMUV-A、0.5μmol/L的引物RA-S和RA-A、0.5μmol/L的引物DPV-S和DPV-A;该检测方法退火温度在46.5~63.8℃之间均可以检测到3种病原体核酸,其中最佳退火温度为57.0℃。该方法检测DTMUV、DPV和RA的核酸最低量分别为6.570,0.600,0.440μg/L。临床样品检测结果显示,本试验建立的DTMUV、DPV和RA多重PCR检测结果与单一PCR检测结果符合率为98.1%。结果表明,本试验建立的复合PCR方法可适用于3种病原体单纯或混合感染的快速诊断,为流行病学调查及快速、准确制定针对性防控措施提供了技术支持。

摘要：为分析河南地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的变异情况,本研究设计合成扩增S基因全长的引物,利用RT-PCR方法,对2014—2015年采集病料中38株PEDVS基因进行扩增、克隆和序列测定,并根据结果构建进化树和进行序列比对分析。S基因进化树分析表明:所有PEDVS基因扩增片段与近年来中国和美国分离的变异毒株亲缘关系较近。序列比对分析表明:扩增的PEDVS基因编码的S蛋白中存在氨基酸的插入和缺失。并且,一些扩增S基因片段在编码的S蛋白的C端有11个氨基酸的缺失。许多扩增的S基因在编码的S蛋白的中和表位COE和2C10区域存在氨基酸突变。这些结果为了解河南地区PEDV变异流行情况和控制PED的暴发提供了基础研究理论。

摘要：根据已克隆的O型口蹄疫病毒VP1基因序列,设计了1对带有SacⅠ和HindⅢ酶切位点的引物,用其将pMD18-T-VP1质粒中的VP1基因亚克隆到真核表达载体pBlueBacHis2A中,成功地构建了重组表达质粒pBlueBacHis2A-VP1(633bp)。将pBlueBacHis2A-VP1(633 bp)质粒与Bac-N-BlueTMDNA共转染sf9昆虫细胞,蚀斑筛选重组病毒后,将纯化的重组病毒感染sf9细胞,获得了32.6 ku的目的蛋白条带。Dot-ELISA分析结果表明,该表达产物具有反应活性,可用于建立间接ELISA方法,进行口蹄疫病毒抗体检测。

摘要：为了建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的RT-PCR检测方法,根据GenBank中登录的PEDV M基因序列,设计并合成1对特异性检测引物,PCR产物为457 bp。结果显示:特异性试验,猪瘟病毒(CSFV)、大肠杆菌、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均为阴性,具有好特异性;敏感性试验,最低可检测到2.3×10-3μg/μL的PEDV DNA;126份临床上疑似为PEDV感染的病料,RT-PCR检测结果与商品试剂盒符合率为100%。表明本试验建立的PEDV RT-PCR检测方法可用于临床上PEDV感染引起的传染病病原学检测。

摘要：为了建立一种猪传染性胃肠炎(TGE)的病原检测方法,试验根据Gen Bank中登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因序列设计了1对特异性引物,采用RT-PCR方法进行检测。结果表明:该方法具有高度的特异性和较好的重复性,可检测到1×10-3μg/μL的TGEV DNA,并可用于临床上TGEV感染引起的传染病病原学的检测。

摘要：2009年7～9月,信阳农业高等专科学校动物科学系,组织2007级畜牧兽医专业在校二年级大学生共计271名同学,参加了暑期为期三个月的教学实习活动.为了更好地开展今后的教学实习活动及评价此次教学实习效果,我系向该专业同学发出实习问卷271份,收回有效问卷271份,问卷设计选择题30道,问答题5道.

摘要：本研究旨在分析淮南麻鸭IGF-Ⅰ基因的结构特点以及获得编码的蛋白。根据GenBank数据库中鹅、鸡和鸭的IGF-Ⅰ基因序列,设计1对引物P1/P2,利用RT-PCR方法克隆了淮南麻鸭的包含有编码区的部分IGF-Ⅰ基因。将IGF-Ⅰ编码区基因连接到原核表达载体pPROEXTMHTb,然后转化到感受态菌DH5α中,经终浓度为1.0 mmol/L的IPTG诱导表达IGF-Ⅰ融合蛋白。结果表明:获得了534 bp的淮南麻鸭IGF-Ⅰ部分基因,经过生物信息进行序列分析,包括1个462 bp的开放阅读框,可编码153个氨基酸,与鸭、鸡、人、绵羊、牛、野猪和大鼠的同源性分别达到99%、99%、84%、81%、83%、84%和78%;经SDS蛋白质电泳结果表明,成功获得分子量约27 ku的IGF-Ⅰ融合蛋白,纯化后经Western-blotting鉴定,可与兔抗人IGF-Ⅰ抗体发生特异性免疫反应。