摘要：目的建立乙型脑炎减毒活疫苗中猪圆环病毒1型(porcine circovirus 1,PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法参照Gen Bank中登录的PCV1(AY193712)及PCV2序列(AY181946)设计引物,以提取的PCV1和PCV2基因组DNA为模板,分别经PCR扩增726 bp的PCV1片段和433 bp的PCV2片段,并对PCR反应中的退火温度、引物浓度、Mg2+浓度参数进行优化。将PCR扩增产物分别与p MD18-T载体连接,连接产物转化感受态大肠埃希菌DH5α,挑取阳性克隆,测序并进行同源性分析。对优化的PCR方法进行灵敏度和特异性验证,并用该方法检测3批乙型脑炎减毒活疫苗工作种子批、4批明胶和10批胰蛋白酶中的PCV1和PCV2。结果确定PCR反应的退火温度为54℃,引物浓度为10μmol/L,Mg2+浓度为10 mmol∕L。扩增的目的基因测序结果与Gen Bank中发布的PCV1及PCV2序列的同源性均为100%。建立的PCR方法最低可检出10 pg的目的基因;该方法只对PCV1和PCV2基因组DNA能扩增出特异性条带。用该方法检测乙型脑炎减毒活疫苗工作种子批、明胶和胰蛋白酶,均未检出PCV1和PCV2。结论成功建立了乙型脑炎减毒活疫苗中PCV1和PCV2的PCR检测方法,该方法具有较高的灵敏度和较强的特异性,可用于乙型脑炎减毒活疫苗工作种子批及两种猪源性原材料的PCV1和PCV2污染检测。

摘要：DTwP -rHB联合疫苗是根据CVI的宗旨研制的以DTP为基础的并与基因工程乙肝疫苗 (CHO细胞产 )相联合的新的儿童疫苗。为了进一步地研究在联合配制后DTwP疫苗中各单一组分与rHB疫苗之间在抗原的免疫原性方面存在何种相关作用 ,我们设计了本试验 ,即将D、T、wP和rHB组分分别配合 ,根据《中国生物制品规程》的要求检测各配合组制品中各组分的免疫力 ,以证实各组分抗原之间是否存在免疫增强作用或是免疫干扰作用。通过试验我们确认D、T及wP组分对rHB组分的免疫原性无干扰作用且有增强作用 ,而rHB组分对D、T及wP各组分的免疫原性无干扰作用。