摘要：目的:构建人野生型亚细胞定位PTEN基因真核表达载体,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础。方法:以胎盘组织RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增目的基因片段。PCR产物与T载体连接,转化大肠杆菌,获得T-PTEN质粒,进行酶切鉴定和测序。以T-PTEN质粒为模板,利用PCR技术将核定位信号(NSL)加入PTEN序列。PCR产物与T载体连接,转化大肠杆菌,获得T-NSL-PTEN质粒。真核表达载体pcDNA3.1及T-NSL-PTEN质粒经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后连接,转化大肠杆菌,获得重组载体pcDNA3.1-NSL-PTEN,进行酶切和测序鉴定。结果:重组质粒PUM-PTEN酶切在1200bp处见目的片段,与预期结果符合。测序结果显示基因序列与目的基因完全一致;重组质粒PUM-NSL-PTEN酶切在1200bp处见目的片段,测序结果显示基因序列与设计一致,核定位信号成功加入;重组质粒pcDNA3.1-PTEN酶切在1200bp处见目的片段,测序结果显示基因序列与目的基因相同;重组载体pcDNA3.1-NSL-PTEN经双酶切和测序证实了其正确性EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切在1200bp处见目的片段,与预期结果一致。测序结果显示,核定位信号成功加入,其后是阅读框架正确的PTEN基因序列。结论:成功构建可表达亚细胞定位PTEN的真核表达载体pcDNA3.1-NSL-PTEN。

摘要：目的：观察宫颈癌根治术后三维适形放疗（three dimensional conformal radiation therapy，3D—CRT）临床应用的价值，以探讨宫颈癌根治术后理想的放疗技术。方法：155例Ⅰ-Ⅲa期宫颈癌根治术后患者，随机分两组，其中三维适形放疗组81例，常规放疗组74例。按FIGO分期，Ⅰ期45例、Ⅱa期77例、Ⅱb期31例、Ⅲa期2例，均经病理证实，其中鳞癌148例、腺癌7例。靶区范围：包括阴道上部、宫颈残端、宫旁组织、髂总、髂内外、闭孔、骶前区及盆腔淋巴引流区。照射方式：三维适形放疗设计4个野轮照或两个野轮照（即前后野与左右野轮照）；常规放疗为前后两野对穿照射。剂量48—50Gy，Ⅱb期术后残端“Boost”剂量8～10Gy。结果：三维适形放疗组与常规放疗组的0．5年、1年、1．5年、2年的肿瘤局部控制率相比，差异无统计学意义，而三维适形放疗组的并发症少于常规放疗组，两组的早晚期胃肠道反应及泌尿系统反应差异有统计学意义（P〈0．05）。在宫颈癌根治术后放射治疗模式中，采用三维适形放疗优于常规放疗两野前后对穿照射。结论：宫颈癌根治术后三维适形放疗是优于常规放疗的放疗技术，三维适形放疗4个野轮照不但具有剂量集中、均匀、副作用小及并发症少的优点，而且还明显体现了侧野及残端“Boost”优势。

摘要：目的:探讨容积旋转调强放射治疗(RapidArc)与五野调强放射治疗(5F-IMRT)在局部晚期胰腺癌治疗中剂量分布特点,为临床选择合适的照射技术提供参考。方法:选择局部晚期胰腺癌患者10例,行CT模拟定位,并勾画靶区及危及器官。分别对每例患者设计RapidArc计划和5F-IMRT计划,评估靶区及危及器官的剂量学差异。结果:RapidArc计划的靶区适形指数(CI)优于5F-IMRT计划(P=0.01),其靶区均匀性指数(HI)比较差异无统计学意义(P>0.05);RapidArc计划中脊髓最大剂量(D_(max))低于5F-IMRT计划(P=0.005);RapidArc计划中胃平均剂量(D_(mean))低于5F-IMRT计划(P=0.019);5F-IMRT计划中肾脏V20低于RapidArc计划(P=0.043);RapidArc计划中小肠平均剂量(D_(mean))低于5F-IMRT计划(P=0.011);RapidArc计划中小肠V10低于5F-IMRT计划(P=0.015);RapidArc计划中小肠V20低于5F-IMRT计划(P=0.14);RapidArc计划较5F-IMRT计划的平均机器跳数(MU)减少了18.0%,治疗时间缩短了70.3%。RapidArc计划肝脏和肾脏等危及器官受量接近或略小于5F-IMRT计划。结论:RapidArc计划的主要优势为靶区适形度高,可减少MU和缩短治疗时间,能更好地降低危及器官受量。临床上建议设计RapidArc计划。

摘要：目的:构建乏氧(HRE)/辐射(Egr1)双敏感启动子介导的分泌型人TRAIL(shTRAIL)基因表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,观察乏氧和辐射对其表达的影响。方法:利用化学合成HRE上、下链,PCR扩增得到双链HRE;pMD19T-Egr1经SacⅠ和HindⅢ双酶切得到Egr1;pshuttle-shTRAIL经KpnⅠ和BamHⅠ双酶切得到shTRAIL;利用基因重组技术构建含有HRE/Egr1双敏感启动子介导shTRAIL的表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,经酶切、PCR和测序鉴定正确。肺腺癌A549细胞分为正常组、乏氧组(1%)、照射组(6 Gy)和乏氧加照射组;表达载体转染肺腺癌A549细胞,RT-PCR及ELISA法检测shTRAIL的表达。结果:BamHⅠ和SmaⅠ酶切,所得片段大小分别为1 284和4 998 bp、2 292和3 990 bp;以Egr1和shTRAIL引物PCR扩增该载体,得到469和820 bp产物;将pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL进行测序,所得结果与设计一致,说明构建正确。转染肺腺癌A549细胞后,乏氧组、辐射组及乏氧加照射组shTRAIL mRNA和蛋白表达增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),且乏氧加照射组表达更明显。结论:成功地构建了乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因表达的载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL;乏氧及照射能够诱导TRAIL表达增加,且二者具有协同作用。

摘要：目的构建乏氧(HRE)/辐射(Egr1)双敏感启动子介导的分泌型人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)(shTRAIL)基因表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,观察其对肺腺癌A549细胞周期及增殖的影响。方法利用化学合成HRE上、下链,PCR扩增得到双链HRE;利用基因重组技术构建含有HRE/Egr1双敏感启动子介导shTRAIL的表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,经酶切、PCR和测序鉴定正确后,干扰质粒经脂质体介导转染肺腺癌A549细胞,MTT法检测A549细胞增殖的变化,流式细胞术检测A549细胞周期的变化。结果BamHI和SmaI酶切,所得片段大小分别为1284bp和4998bp、2292bp和3990bp;以载体为模板,Egr1和shTRAIL引物进行PCR扩增,可得到469bp和820bp产物;将pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL进行测序,所得结果与设计一致,说明构建正确。转染肺腺癌A549细胞后,乏氧与辐射能够降低细胞增殖能力,增加G0/G1和S期细胞百分比,降低G2/M期细胞百分比(P<0.05,P<0.01),二者联合作用更明显。结论乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因在乏氧和/或辐射条件下能够延长细胞G0/G1和S期,缩短G2/M期,并且抑制肺腺癌A549细胞增殖能力,二者协同作用更明显。

摘要：目的:构建乏氧(HRE)/辐射(Egr1)双敏感启动子介导的分泌型人TRAIL(shTRAIL)基因表达载体pcD-NA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,观察其对肺腺癌A549细胞周期及增殖的影响。方法:利用化学合成HRE上下链,PCR扩增得到双链HRE;利用基因重组技术构建含有HRE/Egr1双敏感启动子介导shTRAIL的表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,经酶切、PCR和测序鉴定正确后,干扰质粒经脂质体介导转染肺腺癌A549细胞,利用流式细胞术和TUNEL检测细胞凋亡变化;利用蛋白质印迹法检测Caspase-3蛋白表达。结果:质粒大小为6282bp,BamHⅠ和SmaⅠ酶切,所得片段大小分别为1284和4998、2292和3990bp;以载体为模板,Egr1和shTRAIL引物进行PCR扩增,可得到469bp和820bp产物;将pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL进行测序,所得结果与设计一致,说明构建正确。转染肺腺癌A549细胞后,乏氧与辐射能够增加细胞凋亡的百分比(P<0.05或P<0.01),两者联合,作用更明显,P<0.01;而且乏氧与辐射也能诱导Caspase-3表达的增强(P<0.05或P<0.01),两者联合作用,表达增加更明显,P<0.01。结论:乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因在乏氧和辐射条件下能够增加肺腺癌A549细胞的凋亡,诱导Caspase-3蛋白表达的增加,两者联合作用效果更明显。