摘要：枯草芽孢杆菌 9315 1的渗透压调节基因proB和proA以重叠基因的方式组织 ,但是表达两个单独的蛋白质ProB和ProA。通过引物设计 ,在抗脯氨酸反馈抑制耐盐突变菌株 9315 1 14的proBA基因重叠区引入一个限制性酶切位点 ,分别扩增出proB和proA基因 ,并构建融合的proBA基因。SDS PAGE分析显示有一条新的分子质量约为85kD的蛋白带出现。相对于表达未融合的proB和proA 。

摘要：根据核苷酸序列分析结果设计引物 ,通过 PCR的方法 ,在嗜碱芽孢杆菌 NTT3 3的总 DNA和 p13 5 0中分别扩增到预计大小的片段 ,证明 p13 5 0中的外源 DNA片段来自于嗜碱芽孢杆菌 NTT3 3 .同时也获得了含有pel A完整 ORF的 DNA片段 .经计算 ,该基因表达的成熟蛋白质的分子量为 3 4 .76× 10 3.构建表达载体 p BV2 2 0 -pel,在 *** DH5α中进行表达 .SDS- PAGE检测发现 ,表达的蛋白质分子的大小约为 3 5× 10 3,与预测的相符 .初步研究其酶学性质发现 ,该酶在 p H 9.0～ p H10 .0 ,4 5°C的条件下有较高的活性 ,而且必需 Ca2 + 参与反应 .

摘要：利用TaKaRaLAPCRTM试剂盒扩增枯草芽孢杆菌 931 5 1耐盐突变株proA基因的未知下游序列。根据测序结果 ,设计引物 ,克隆出发菌株和突变株全长proBA基因。将出发菌株和突变株的proBA基因分别转化大肠杆菌JM83(proBA- ) ,均能够与其功能互补。SDS PAGE分析其表达产物 ,有两条分子量分别约为 4 0kD和 4 5kD的新蛋白带出现。测定 4种转化子 (分别含有出发菌株和突变株proB基因的大肠杆菌 1 1 2 5 2转化子及proBA基因的大肠杆菌JM83转化子 )的耐盐能力。发现含有突变株proB或proBA基因转化子的耐盐能力 ,均比相应的含有出发菌株proB或proBA基因的转化子高。另外含有出发菌株和突变株的proBA基因转化子的耐盐能力 ,也均比相应的仅含proB基因的转化子高 ,表明枯草芽孢杆菌的ProA比大肠杆菌的ProA更为有效。测定所有JM83转化子胞内自由脯氨酸 ,发现其含量随盐浓度的上升而提高 。

摘要：从枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)抗脯氨酸结构类似物突变株中克隆得到脯氨酸合成途径中的关键酶基因proB(编码γ-谷氨酰胺激酶)和proA(编码谷氨酰胺-γ-半醛脱氢酶),同时设计引物从拟南芥基因组中扩增得到吡咯啉-5-羧酸合成酶B基因(p5csB)的第一个内含子序列,将其分别与proB和proA基因通过PCR拼接后,酶切连接构建得到植物双元表达载体pBI121pro。以LBA4404为介导,采用真空抽滤的方法转化得到转proBA基因拟南芥;第三代的纯合子(T3)通过半巢式PCR的方法验证外源基因已整合到拟南芥基因组中,GUS活性分析表明外源基因在叶片中表达最强,茎部其次,根部最弱;对600mmol.L-1致死浓度NaCl耐受能力的分析表明,转基因拟南芥的平均存活时间(37.8min)明显高于野生型拟南芥(26min)。

摘要：以分离筛选到的1株产PHB的蜡状芽孢杆菌13及其经紫外诱变获得的高产菌13(3)为出发菌株,再进行紫外和亚硝酸双因子诱变,筛选到了稳定高产菌株13-2,其PHB产量比野生型菌株13增加了82.63%,比高产菌株13(3)增加了48.01%。设计正交试验。确定突变株13-2培养的最佳发酵条件是碳源为蔗糖,氮源为蛋白胨,p H值为7.5,发酵温度为37℃,发酵周期为16h。