摘要：目的制备甲壳素亲和纯化介质,设计有效的纯化技术路线,对毕赤酵母表达的人g2型溶菌酶(human goose-type lysozyme 2,HLys G2)重组蛋白进行纯化。方法研究碱化、稀酸处理、碱化时间、碱浓度等各种因素对甲壳素介质性能的影响;对重组毕赤酵母进行甲醇诱导表达,依次采用亲和层析、阴离子交换层析、透析等方法从发酵液上清中纯化HLys G2,对最终纯化产物的纯度使用HPLC进行测定,杀菌活性使用双层琼脂平板扩散法进行测定。结果经处理后,在常压下甲壳素亲和介质洗脱速度可达4.5 ml/(min·cm2),对HLys G2吸附容量为1.8 mg/ml,总活性的收率为76.5%,得到的HLys G2纯度>99.0%,对溶壁微球菌具有杀灭活性。结论制备的甲壳素亲和介质具有良好性能,以甲壳素亲和层析为中心的纯化方法可有效纯化HLys G2,为规模化制备HLys G2奠定了基础。

摘要：利用毕赤酵母(Pichia pastoris)重组表达人源类溶菌酶蛋白6(human lysozyme-like protein6,h Lyzl6),对其酶学性质进行分析。根据毕赤酵母密码子偏爱性设计并人工合成h Lyzl6基因,将其连接至含有乙醇氧化酶启动子(AOX1)的p PIC9K质粒构建重组表达载体p PIC9K-hlyzl6;重组表达载体经线性化后电转化入毕赤酵母GS115感受态细胞,经G418筛选获得高拷贝重组菌株后进行甲醇诱导表达。经甲醇诱导72 h后发酵液上清中酶活性达到最高值,发酵液上清经SDSPAGE检测在14.8 k Da处有重组h Lyzl6蛋白条带,分子量符合预期,通过甲壳素亲和层析可对其进行纯化;采用比浊法测定h Lyzl6酶学活性,结果表明h Lyzl6对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)有较好的杀灭作用,最适反应温度为40℃,最适p H为5.5,其酶活力为54 700U/mg,Cu2+对其活性有明显抑制,EC50为30.2799 mg/L。采用基因工程方法首次在毕赤酵母GS115成功表达了重组h Lyzl6,证实其在体外具有杀菌活性,初步揭示h Lyzl6在男性生殖系统先天性免疫中发挥了一定作用,为进一步研究h Lyzl6的功能和应用开发奠定了基础。

摘要：比大学还"大学",比企业还"企业",这是记者走访广东岭南现代高级技工学校的深刻印象。绿树成荫,草长莺飞,现代咖啡,古色茶馆,这是记者在广东岭南现代高级技工学校校园内看到的情景。在这里,很难把它想象成一所技工学校的校园。"我们的校园环境堪比大学,这也是我们最引以为傲的事情。"学校执行校长童国梁高兴地告诉记者,"学校是一所民办技工院校,从10年前在校生不足200人到今天的7000人,

摘要：[目的]寻找具有高杀菌活性的农药先导化合物。[方法]通过活性亚结构拼接法设计并合成一系列的含肟醚片段的二苯醚脒类化合物,其结构经过1H NMR和LCMS确证。[结果]杀菌活性测试结果表明:目标化合物对黄瓜白粉病(Erysiphe cichoracearum)、大豆锈病(Phakopsora pachyrhizi)以及黄瓜霜霉病(Pseudoperonospora cubensis)具有一定的防治效果。其中化合物1b在40 mg/L质量浓度下对黄瓜白粉病的防治效果为100.00%;1a、1b在质量浓度为40 mg/L下对大豆锈病的防治效果均为92.59%;1f在100 mg/L质量浓度下对黄瓜霜霉病的防治效果为100.00%。[结论]含肟醚片段的二苯醚脒类化合物具有一定的杀菌活性,值得进一步研究。