摘要：目的 在外泌体表面表达肝癌靶向肽SP94,并将生长分化因子15(GDF15)的siRNA包裹至外泌体中,研究其对肝癌的治疗作用。方法 首先设计合成GDF15的siRNA,转染Hepa1-6和H22细胞作为实验组,无靶向的siRNA作为对照组,通过实时定量PCR、蛋白免疫印迹和流式细胞术验证GDF15 siRNA的功能。再构建一个靶向肝癌的SP94-Lamp2b-HA质粒,转染入HEK293T细胞后提取工程化外泌体SP94-外泌体,用SP94-外泌体包裹GDF15 siRNA作为SP94-siRNA-外泌体实验组,空载SP94-外泌体作为空载对照组,通过尾静脉注射法将两组外泌体导入小鼠体内,研究小鼠原位肝癌模型的治疗效果,并对小鼠的生存期进行观察。另外,将SP94-siRNA-外泌体尾静脉注射入健康小鼠体内,观察器官变化情况,对比血液生物化学和炎性因子指标差异。结果 成功合成GDF15 siRNA,在转染Hepa1-6和H22细胞后,GDF15的mRNA和蛋白水平表达明显降低(P0.05),表明SP94-siRNA-外泌体对小鼠基本无毒副作用。结论 SP94-siRNA-外泌体可以精准靶向肝癌,并有效地抑制肝癌的生长。

摘要：目的观察敲低Geminin对人脑胶质瘤细胞放疗敏感性的影响。方法利用GEPIA和CGGA数据库分析Geminin在脑胶质瘤组织中的表达及与生存期的相关性。实验分为两组:si-GL2组(对照组)和si-Gem组(干扰组),设计siRNA干扰序列(si-Gem)和阴性对照序列(si-GL2),分别转染脑胶质瘤细胞LN229和U87,qRT-PCR和Western blot检测转染效率及蛋白表达水平。流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后DNA含量分布,进而分析敲低Geminin对DNA再复制的影响。通过AnnexinⅤ-FITC/PI法,用流式细胞术检测敲低Geminin对细胞凋亡的影响。CCK-8细胞增殖实验检测敲低Geminin对胶质瘤细胞LN229和U87放疗敏感性的影响。Western blot检测Geminin相关分子Cdt1和DNA相关损伤蛋白γ-H2AX的表达水平。结果脑胶质瘤组织中Geminin的表达水平高于癌旁正常组织,且Geminin表达越高,脑胶质瘤患者预后越差(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组Geminin在LN229和U87细胞中的表达降低(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组敲低Geminin可诱导脑胶质瘤细胞出现DNA再复制表型、细胞凋亡比例显著增加(P<0.05),脑胶质瘤细胞对放疗敏感性增强(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组Geminin相关分子Cdt1蛋白表达水平降低,γ-H2AX的蛋白表达水平升高。结论敲低Geminin可以诱导脑胶质瘤细胞出现DNA再复制表型,造成DNA复制压力,并引起自发性细胞周期阻滞及细胞凋亡增多,进而增强脑胶质瘤细胞放疗敏感性,Geminin有望成为脑胶质瘤治疗的新靶点。