摘要：根据人和鼠性别分化相关的ZFY、ZFX基因序列设计引物,以雌雄毛冠鹿的基因组DNA为模板进行PCR扩增,将扩增产物克隆到pMD18T上,获得ZFY、ZFX重组克隆,并测定了ZFY、ZFX基因片段的序列,序列比较显示两者同源性达91%,仅在少数位点有差异,以此确定AvaⅡ为ZFX上特异酶切位点,通过PCR扩增和AvaⅡ特异酶切对毛冠鹿性别进行鉴定。

摘要：为了检测、区分猪传染性胃肠炎 (TGE)和猪流行性腹泻 (PED) ,建立了同时检测这 2种疾病病原体的多重 PCR方法。参考 Gen Bank登录的 TGEV和 PEDV纤突蛋白 S基因序列 ,经 DNAsis 2 .0比较分析 ,分别筛选出 TGEV、PEDV S基因相对保守区。以 TGEV TH- 98株 (Gen Bank登陆号为 AF4 94 337)和 PEDV CV777株 (Gen Bank登陆号为 NC0 0 3436 )为参考模板 ,利用软件 Primer 3设计合成了 2对寡核苷酸引物 ,以 ST细胞培养的 TGEV和 PEDV毒株核酸为模板 ,利用所设计的 2对引物进行多重 RT- PCR扩增 ,结果同时得到与试验设计相符的 4 99bp(TGEV)和199bp(PEDV)的扩增条带 ,而对其他 3种猪病原的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明 ,建立的多重 RT- PCR方法可检测出 10 pg TGEV RNA和 10 0 pg PEDV RNA。

摘要：目的:构建携带沉寂Survivin基因表达特异性siRNA的重组腺病毒载体,观察其在荷瘤动物体内对Survivin基因的表达以及对瘤细胞放射敏感性的影响。方法:设计合成针对Survivin基因序列的siRNA,构建并重组腺病毒AdEGFP-siR-NA。建立裸鼠SMMC7721肝癌移植瘤模型,分5组进行实验,siRNA+放疗组和siRNA组以AdEGFP-siRNA瘤内多点注射,siRNA(-)组以AdEGFP-siRNA(-)瘤内多点注射,隔日1次,每次2×108pfu/100μl,共5次;单纯放疗组和空白对照组以等量生理盐水代替病毒注射;于第10、12、14、16天siRNA+放疗组和单纯放疗组给予5Gy/次的照射;定时测量瘤体体积;观察周期结束,取瘤组织免疫组化检测Survivin蛋白的表达。结果:成功构建并重组表达Survivin基因特异性siRNA序列和绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的腺病毒AdEGFP-siRNA。裸鼠SMMC7721移植瘤在注射AdEGFP-siRNA后生长受到明显抑制,抑瘤率为56.2%;AdEGFP-siRNA病毒治疗和放疗结合,可将抑瘤率提高到82.6%。移植瘤组织免疫组化检查显示,特异性siRNA显著降低了肝癌细胞Survivin的表达。结论:Survivin特异性siRNA能够沉寂其基因的表达和抑制肿瘤的生长,同时可以提高肿瘤细胞的放射敏感性,改善治疗效果。

摘要：从毛冠鹿睾丸cDNA文库中筛选出毛冠鹿AIF-1基因,对其进行生物信息学分析,设计引物克隆毛冠鹿AIF-1 cDNA,连入pMD19-T载体,测序正确后酶切,与表达载体pET-28a(+)连接,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达,将诱导表达重组蛋白的菌体超声破碎后,进行可溶性分析,并对可溶性蛋白进行纯化,SDSPAGE电泳,Western Blot分析以及鉴定重组蛋白.结果表明,毛冠鹿AIF-1(TdAIF-1)含有1个438bp的开放阅读框,编码145个氨基酸,经测序和酶切鉴定后,成功构建重组质粒pET-28a(+)-TdAIF-1,表达大小约20 kD的重组蛋白,主要以可溶形式存在,提高洗脱缓冲液中咪唑浓度至50 mmol/L、100 mmol/L能够得到较纯的蛋白.成功构建毛冠鹿AIF-1原核表达体系,获得重组蛋白,为研究AIF-1蛋白的生物学功能奠定了基础.

摘要：利用赤麂SRY基因序列设计引物,通过PCR反应分别扩增出毛冠鹿、黑麂、小麂的SRY序列,并测得630 bp的碱基序列。麂属动物之间的序列差异为0.79%-1.90%,毛冠鹿属与麂属之间的序列差异为3.02%-3.97%。以牛SRY为外源,用NJ法和MP法进行毛冠鹿和麂属3种动物分子系统进化树的构建与分析,结果表明：麂属3种动物之间的分歧时间为79万-190万年,毛冠鹿与麂属动物间的分歧时间为302万-397万年,梅花鹿与麂属动物的分歧时间为349万-460万年。

摘要：采用AS PCR方法和SOE技术相结合的策略 ,通过找出猪α干扰素基因内部的特异位点 ,设计引物扩增出两个DNA片段并将其连接为全长基因。所得片段编码序列长 5 0 1bp ,共编码 16 6个氨基酸。与已知PoIFN α1基因有 5个碱基差别 ,导致

摘要：麂亚科（Muntiacinae）动物包括麂属（Muntiacus）和毛冠鹿属（Elaphodus），分布于东南亚、中国及印度，动物形态相似，但具有令人瞩目的细胞遗传学特性．本文以赤麂（Muntiacus muntjak）、黑麂（Muntiacus crinifrons）、小麂（Muntiacus reevesi）和毛冠鹿（Elaphodus cephalophus）4种麂亚科动物为材料，以3-磷酸甘油醛脱氧酶（GAPDH，管家基因）为靶基因，对毛冠鹿在麂亚科中分类地位进行分子鉴定．提取这4种动物的基因组DNA，根据人的GAPDH基因设计引物，进行PCR扩增．获得了约为300bp的扩增产物．将纯化后的扩增产物克隆到质粒pMD18＋TVector中，转化DH-5a菌，挑选阳性克隆。用M13-47／RV—M通用引物进行测序．测序的结果经clustal软件进行了同源性比较．结果显示：麂属动物种问GAPDH基因间的DNA差异在2．52％～4．37％之间，毛冠鹿与麂属3种动物的差异在1．79％-2．87％之间．这些变异以碱基的转换为主．本文结果支持毛冠鹿为独立属1种的分类观念．

摘要：目的构建2型猪链球菌荚膜多糖基因簇中cps2D基因敲除株(Δcps2D),比较野毒株05ZYH33与敲除株Δcps2D基本生物学特性的差异。方法设计合成引物L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2,分别扩增cps2D基因上、下游同源臂L片段、R片段及Spc^(R)抗性基因S片段,将3个片段连接至pUC19线性载体上,构建敲除质粒pUC19::cps2D。将敲除质粒电转导入05ZYH33感受态细胞后,利用Spc^(R)抗性平板筛选敲除株,并通过组合PCR和RT-PCR进一步验证。比较野毒株05ZYH33和敲除株Δcps2D细菌生长特性、溶血活性、革兰染色、细菌链长、荚膜形态等方面的异同。结果L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2三组引物分别扩增出L(1030 bp)、R(1030 bp)以及S(1130 bp)基因片段;通过无缝克隆的方法成功构建出敲除质粒pUC19::cps2D;电转入感受态细胞后获得69个克隆,筛选出26个疑似敲除株;组合PCR以及RT-PCR筛选后获得cps2D基因敲除株Δcps2D;与野毒株05ZYH33相比,Δcps2D对数期生长变缓,链长显著变短,荚膜稀疏变薄。结论成功构建cps2D基因敲除株,为后续进一步研究其调控荚膜合成的作用机制奠定基础。

摘要：目的制备2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)酪氨酸激酶Cps2C重组蛋白及其抗血清,为进一步研究Cps2C的作用奠定基础。方法采用在线工具对cps2C基因进行生物信息学分析。设计cps2C基因引物,以05ZYH33菌株基因组DNA为模板PCR扩增cps2C基因,构建pET32a:cps2C重组质粒;重组质粒转入感受态*** BL21后,IPTG诱导表达Cps2C重组蛋白,经Ni2+亲和层析纯化后用His单克隆抗体进行鉴定。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,获得多克隆抗血清,采用间接ELISA法测定抗体效价。结果成功构建pET32a:cps2C表达质粒,获得阳性*** BL21Cps2C重组蛋白表达菌株,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白条带单一,相对分子质量为43×103,与预期一致;Western blot检测Cps2C重组蛋白可以与His单克隆抗体、感染05ZYH33全菌的猪恢复期血清反应。制备的多克隆抗血清效价为1∶819 200,且能与重组蛋白反应。结论原核表达了具有抗原性的Cps2C重组蛋白,制备的鼠源多抗血清能识别Cps2C蛋白,为研究Cps2C蛋白在2型猪链球菌中的作用奠定了基础。