摘要：目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent-kinase 2,CDK2)活性对肝癌细胞株HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响。方法:根据基因库中登录的人和鼠CDK2、cyclinE序列,设计并构建CDK2、cyclinE干扰RNA真核表达载体;脂质体法转染肝癌细胞株HepG2细胞,流式细胞术分析CDK2及cyclinE对HepG2细胞增殖的影响;蛋白质印迹法检测CDK2、cyclinE活性的变化caspase-3活性的影响。结果:1.成功构建CDK2及cyclinE干扰RNA真核表达载体psiCDK2、psiCyclinE,用脂质体法导入肝癌细胞株HepG2细胞中,有效表达。2.转染48h后与空载体组相比:psiCDK2、psiCyclinE组G1期细胞增多,G2/M和S期细胞减少;蛋白质印迹法分析表明psiCDK2、psiCyclinE组caspase-3酶原被激活。结论:靶向CDK2、cyclinE的siRNA能抑制HepG2细胞的增殖;靶向CDK2、cyclinE的siRNA能激活caspase-3,诱导肝癌细胞HepG2凋亡。

摘要：目的　探讨聚合酶链反应 (PCR)技术在细粒棘球蚴检测和诊断中的应用 ,建立 DIG标记DNA杂交诊断技术。方法　根据细粒棘球蚴基因片段克隆与序列分析 ,设计了一对特异性引物 ,P15′- GGAATGGAGAGAAGTTAC- 3′ P2 5′- GCAACCTCCGGAACTTGC- 3′。以棘球蚴的囊液、子囊及原头蚴为模板 ,经 PCR扩增获得 4 71bp特异性区带。将扩增产物纯化后 ,用 DIG标记 DNA ,将制备成的特异性核酸探针用于细粒棘球蚴检测。结果　经对大肠杆菌、粪肠杆菌、结核分支杆菌、猪囊尾蚴、健康人白细胞进行 PCR扩增和 DIG标记 DNA探针斑点杂交 ,只有细粒棘球蚴出现单一 4 71bp特异性区带。 PCR的灵敏性为检出单个原头蚴及 10 0～ 10 fg水平的 DNA,而斑点杂交的敏感性为 2 5 0 0 fg。异源性 DNA即使提高点膜量 ,亦不出现阳性反应。结论　配以 DIG标记的 PCR技术在细粒棘球蚴的检测中具有特异、敏感、快速、准确的特点。

摘要：目的 :该项研究旨在探讨聚合酶链反应 (PCR)技术在细粒棘球蚴检测和诊断中的应用 ,同时建立Digoxinum(DIG)标记DNA杂交诊断技术。方法 :根据细粒棘球蚴基因片断克隆与序列分析 ,设计了一对特异性引物 ,P15′—GGAATGGAGAGAAGTTAC— 3′,P2 5′—GCAACCTCCGGAACTTGC— 3′。以棘球蚴的囊液、子囊及原头蚴为模板 ,经PCR扩增获得 471bp特异性区带。将扩增产物纯化后 ,用DIG标记DNA ,制备成功特异性核酸探针并用于细粒棘球蚴检测。结果 :经对大肠杆菌、痢疾杆菌、结核分枝杆菌、猪囊尾蚴、健康人白细胞进行PCR扩增和DIG标记DNA探针斑点杂交 ,只有细粒棘球蚴出现单一 471bp特异性区带。PCR的灵敏性为可检出单个原头蚴及 1 0 0— 1 0fg水平的DNA ,而斑点杂交的特异性为 2 5 0 0fg。异源性DNA即使提高点膜量 ,亦不呈现阳性反应。结论 :配以DIG标记的PCR技术在细粒棘球蚴的检测中具有特异、敏感、快速、准确的特点。

摘要：结合目前液压支架行业油缸通用导向环的尺寸结构,通过对导向套和活塞杆极限间隙的推算,导出合理的间隙计算公式,从而为油缸密封与导向间隙的设计提供出合理的理论依据,降低实际应用中导向套与活塞杆因金属接触造成油缸损坏的可能性,并提出了导向套结构的合理改进方案。