摘要：【目的】旨在利用SSR荧光标记对榧树雄株5个野生居群的121个单株进行遗传多样性及群体遗传结构分析,为榧树雄株遗传背景、种质资源评价和优良种质筛选提供参考。【方法】采用CTAB法提取榧树基因组DNA,设计引物,通过荧光引物PCR扩增方法,利用毛细管电泳检测技术检测榧树雄株的多态位点。【结果】24对引物共检测到85个等位基因,变幅为2~7个,平均每个标记有3.542个,其中平均有效等位基因有1.915个。5个居群的平均Nei’s遗传多样性指数为0.365,平均Shannon’s信息指数为0.608。5个居群中,多态位点百分比为75.00%~95.83%,平均为82.50%,居群遗传多样性从大到小依次为嵊州居群、临安居群、富阳居群、黄山居群、淳安居群。居群间的基因流为4.172,遗传分化系数为0.096,遗传分化程度很低。聚类分析结果表明:5个居群的遗传相似度为0.865~0.978,平均为0.932。【结论】雄性榧树居群的遗传多样性较丰富。榧树雄株的遗传变异主要存在于居群内,但居群间也存在一定的基因交流。5个居群可以分为3大类群,这与表型的遗传多样性分析结果比较相似。

摘要：微型反向重复转座元件(miniature inverted repeat transposable elements,MITEs)在植物中广泛分布,可产生适应性的遗传变异,尤其可在非重组无性繁殖物种中产生变异,可用于遗传多样性分析。为促进山核桃的遗传学研究,本研究运用MITE Digger软件对山核桃基因组测序数据进行扫描,共识别得到739条山核桃MITE序列。基于MITE序列,使用Primer-BLAST在线设计引物680对,占MITE序列的92.02%。基于小麦的MITE-PCR体系,通过降低退火温度5℃优化了山核桃的反应体系。随机挑选300对引物进行筛选,其中108对引物具有稳定的扩增产物。108对引物中100对引物在不同单株山核桃个体中扩增呈现单条带,占92.6%,8对引物扩增呈现双条带,占7.4%。PCR产物测序结果发现,呈现单条带的PCR扩增产物均包含MITE序列,但呈现双条带的PCR扩增产物中大多不含有MITE序列。研究结果为山核桃遗传多样性研究提供了科学依据。

摘要：基因分离可以从蛋白质水平、DNA水平及mRNA水平来进行操作。差异显示反转录聚合酶链式反应是目前使用频率最高的用于克隆未知基因的方法。本文从其本原理出发 ,概述了其优缺点 ,并从引物设计、反转录酶与Taq聚合酶、阳性克隆、应用、差显的衍生等诸方面就差显的研究进展作了综述。

摘要：以舟山群岛的普陀樟(Cinnamomum japonicum ***)新鲜叶片为实验材料,采用L16(45)正交试验设计,对影响普陀樟SRAP-PCR反应的Mg2+浓度、dNTPS、Taq DNA聚合酶、引物和模板DNA用量5因素组合进行了筛选。结果表明:适于普陀樟的SRAP-PCR反应体系(20μL)为2.5 mmol/L Mg2+、0.2 mmol/L dNTPs、1.5 U Taq DNA聚合酶、0.4μmol/L引物、10 ng模板DNA、2μL 10×PCR buffer,该体系位点清晰,扩增稳定;利用该反应体系从100对SRAP引物组合中筛选出多态性好的引物24对。

摘要：基于山核桃Carya cathayensis脂肪代谢相关cDNA文库的部分测序结果,发现43条cDNA序列具有简单重复序列(SSR)碱基重复特点,用Primer Premier 5设计了34对表达序列标签-简单重复序列(EST-SSR)引物;建立了适用于山核桃的SSR分析体系,并用设计的SSR引物对对天然群体山核桃40个样品进行了初步的应用性试验。结果表明:34对引物中有4对无扩增产物,3对引物的扩增产物超过了设计范围,27对引物在供试的40个山核桃材料中有较清晰且稳定的目标扩增产物,其中有18对引物的扩增产生了22个多态性位点,占总扩增位点数的47.8%。将SSR标记分析结果与山核桃已有的显性标记分析结果进行比较,发现SSR标记多态性位点的比例较高,且能够区分显性纯合位点及显性杂合位点。结论:设计开发山核桃的EST-SSR标记是可行有效的。