摘要：抗原-抗体的特异性结合是由抗体表面的抗原决定簇与抗原表面的表位基序间的特异性互补识别决定的。B细胞表位作图既包括B细胞抗原表位基序的鉴定(即确定抗原分子上被B细胞表面受体或抗体特异性识别并结合的氨基酸基序),也包括绘制抗原蛋白的全部或接近全部的B细胞表位基序在其一级或高级结构上的分布图谱的过程。B细胞表位作图是研发表位疫苗、治疗性表位抗体药物和建立疾病免疫诊断方法的重要前提。目前,已经建立了多种B细胞表位鉴定或绘制抗原蛋白B细胞表位图谱的实验方法。基于抗原-单抗复合物晶体结构的X-射线晶体学分析的B细胞表位作图和基于抗原蛋白或抗原片段的突变体库筛选技术的B细胞表位作图可以在氨基酸水平,甚至原子水平上揭示抗原分子上与单抗特异性结合的关键基序;其它B细胞表位作图方法(如基于ELISA的肽库筛选技术)常常只能获得包含B细胞表位的抗原性肽段,因而,很少用于最小表位基序的鉴定;而改良的生物合成肽法多用于B细胞表位的最小基序鉴定和精细作图。鉴于每种B细胞作图方法都存在各自的优势与不足,B细胞表位作图往往需要多种作图方法的有机结合。本文对目前常用的B细胞表位作图的实验方法及其在动物疫病防控中的应用进行综述,以期为研究者设计最佳的表位作图方案提供参考。

摘要：近年来,番鸭细小病毒出现新的流行趋势,估计与病毒基因变异有关,因此针对新流行毒株研发新的检测方法很有必要。本研究根据番鸭细小病毒(MDPV)2012年分离株SAAS-SHNH的全基因序列,设计了一对特异性引物,利用PCR技术扩增全长vp3基因,经鉴定正确后,进行同源性比对分析,同时将其克隆到PET28a载体,构建成PET28a-VP3原核表达载体,经转化及IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳和Western blotting分析,表达出与预期大小相符的63.1 k Da的蛋白,该蛋白可与临床采集的免疫过MDPV的番鸭血清结合,说明该蛋白可用于MDPV的血清学检测。将纯化后蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔源MDPV-VP3蛋白的多克隆抗体,制备的兔源血清能够与MDPV疫苗弱毒株及J3D6株VP3蛋白发生特异结合;MDPV感染原代鸭胚成纤维细胞(DEF)后,利用兔源血清作为一抗进行免疫荧光分析(IFA)分析,在DEF细胞核和细胞质内均能检测到VP3蛋白,表明利用VP3蛋白制备的抗血清可以用于MDPV免疫荧光分析细胞增殖病毒的检测。这为今后MDPV的快速检测提供了技术基础。

摘要：本试验研究了不同水平的γ-氨基丁酸(GABA)对断奶仔猪生产性能和血液激素水平的影响,旨在探讨GABA对断奶仔猪的生长和激素变化的调节作用。试验采用随机区组设计将45头28日龄杂交断奶仔猪分为3个处理,每个处理5个重复,每个重复3头猪,分别饲喂添加0、0.04%和0.08%GABA的日粮。试验期28 d。试验结果表明:在43～56日龄,GABA显著改善了仔猪的平均日增重(P=0.048 9)和日采食量(P=0.035 6),但对料重比无显著影响(P>0.05)。在试验全期(28～56日龄),随着日粮中GABA水平的增加,仔猪的日采食量(P=0.110 7)和平均日增重(P=0.131 7)呈增加趋势。0.08%的GABA可以显著增强42日龄仔猪血清胃泌素水平,0.04%和0.08%GABA均可显著增强56日龄仔猪血清胃泌素水平(P<0.05)。0.08%GABA均能显著提高42日龄和56日龄仔猪血清胰岛素水平(P<0.05)。42日龄时,2个GABA组血清游离脂肪酸较对照组有显著升高,56日龄时,日粮添加0.08%的GABA显著了提高血清游离脂肪酸水平(P<0.05)。42日龄时,日粮添加0.08%GABA的仔猪血清脂肪酶活性较对照组有显著升高(P<0.05);56日龄时,2个GABA组血清脂肪酶活性均显著升高,且0.08%GABA组较0.04%GABA组也有显著增强(P<0.05)。本试验结果提示GABA能够短期改善仔猪的采食量和日增重,并调节与采食关系较为密切的胃泌素变化。

摘要：利用DNASta软软件对GeneBank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因序列进行分析,选择保守区域设计合成引物和探针,制备M基因重组质粒标准品,建立检测PEDV的TaqMan荧光定量PCR方法,并验证其敏感性、特异性及重复性。结果表明:建立的定量标准曲线Ct值和模板起始拷贝数对数在10~8—10~1copies/μL有良好的线性关系,相关系数R^2为0.997,该方法可检测到初始模板中6.368 copies/μL的质粒DNA;应用该方法检测49份临床样品,阳性率达98%,比普通RT-PCR方法检测的阳性率高18%。研究表明,建立的PEDV TaqMan荧光定量PCR检测方法具有较好的灵敏性、特异性和重复性,适用于临床样本中PEDV的快速检测,为PEDV的感染和增殖规律的研究奠定了基础。