摘要：为了建立同时检测多种耐药基因的快速检测方法,本研究以bla_(TEM-1)、bla_(TEM-1)、fosA3基因保守序列设计特异性引物,经优化反应条件,建立恒温检测上述3种耐药基因的多重重组聚合酶扩增(RPA)方法。条件优化结果显示,所建立的RPA方法在引物浓度为480 mmol/L,37℃恒温反应20 min时检测效果最佳。该方法对携带bla_(TEM-1)、bla_(TEM-1)、fosA3基因的菌株能扩增出条带,阴性菌株无条带,特异性高;对bla_(TEM-1)、bla_(IMP-3)基因的最低检出限为1.8×10^(1)拷贝/μL,对fosA3基因的最低检出限为1.8×10^(2)拷贝/μL,敏感性较强。用多重RPA方法对浙江省内水产养殖环境及生物体中分离到的400株菌株进行检测,养殖用水分离菌株的bla_(TEM-1)、bla_(TEM-1)和fosA3检出率分别为81.00%(81/100),11.00%(11/100)和29.00%(29/100);水产动物体内分离菌株的bla_(TEM-1)、bla_(IMP-3)和fosA3检出率分别为73.67%(221/300),1.33%(4/300)和23.33%(70/300),与常规PCR基本一致。建立的RPA方法操作简单、反应快速、检测限低、结果可靠,适用于多种耐药基因的快速检测,为快速摸清养殖产业链各环节的耐药基因谱,减少耐药基因传播,保障食品安全提供了技术支撑。