摘要：【目的】基于前期筛选到的*** PT121所产有机溶剂耐受性蛋白酶,本研究对该蛋白酶进行克隆表达,研究了重组蛋白的酶学性质及小肽合成上的应用。【方法】参考文献中报道的相似蛋白酶pseudolysin设计引物从菌株PT121基因组中克隆到耐有机溶剂蛋白酶PT121基因las B。构建诱导表达重组质粒p ET22b-las B,于大肠杆菌中进行表达。考察蛋白酶PT121酶学性质及小肽合成上的应用。【结果】序列分析表明las B基因编码信号肽、前肽及成熟肽3个部分,成熟肽部分含有301个氨基酸,分子量约33 k Da,属于金属蛋白酶M4家族。通过破碎条件优化,一步法制备得到较为纯净的重组蛋白酶PT121,其比活力达7700 U/mg,该酶呈现了较高的热稳定性,p H稳定性及溶剂耐受性,与野生菌*** PT121所产蛋白酶性质一致。在50%DMSO体系中高效催化合成了多种小肽,其中阿斯巴甜前体(Cbz-Asp-Phe-NH2)产率高达91%。【结论】蛋白酶PT121基因在大肠杆菌中克隆表达为进一步研究相关催化机理及分子改造奠定了基础。

摘要：基于来源于Bacillus cereus WQ9-2的耐有机溶剂蛋白酶WQ的液相色谱-双质谱(LC-MS-MS)分析结果,设计引物,克隆耐有机溶剂蛋白酶WQ的基因,测序分析表明该蛋白酶的开放阅读框(ORF)大小为1 701 bp,编码566个氨基酸,其中含有信号肽(28个氨基酸)、前肽(220个氨基酸)及成熟肽序列(含954 bp编码318个氨基酸),相对分子质量约为3.7×104。将不带自身信号肽的蛋白酶基因apr WQ插入穿梭质粒p MA5中,构建了表达载体p MA5/apr WQ。该表达载体导入枯草芽胞杆菌WB600中获得阳性重组子WB600-p MA5/apr WQ,通过优化培养基成分以及培养条件,重组子发酵产蛋白酶体积酶活达到17 400 U/m L,约为高产野生菌产酶量的5倍。重组蛋白酶在多种有机溶剂(体积分数为50%)中表现出了良好的耐受性,验证了重组菌表达的蛋白酶与来源于*** WQ9-2的耐有机溶剂蛋白酶性质一致,该耐有机溶剂蛋白酶的高效表达为进一步发挥其高效生物催化作用等实际应用奠定了基础。

摘要：将最新科研成果阿斯巴甜前体酶法合成融入制药工艺学实验教学中,在前期自行构建的肽合成酶突变体基础上,以苄氧羰基天冬氨酸和苯丙氨酸甲酯为底物,通过一步酶法合成苄氧羰基阿斯巴甜。本实验可以扩宽学生视野,熟悉利用生物酶制备高附加值化合物,掌握相关设备使用,了解科学前言,培养学生对科学研究的热爱。

摘要：研究影响白及多糖提取的因素,优化其提取工艺及探究其抑菌活性。通过单因素和响应曲面法,选择提取次数、水提时间、水提温度、液料比4个因素筛选白及多糖的最佳水提工艺,蒽酮-硫酸法测定白及多糖的含量,滤纸片-抑菌圈法测定白及多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌及黑曲霉菌的抑菌作用。经由以上实验设计可得白及多糖最佳提取工艺为:提取次数1次、水提时间2.2 h、水提温度77℃、液料比39.27 mL/g,白及多糖得率31.09%;白及多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌及黑曲霉菌均有抑制作用。

摘要：针对生物化学与分子生物学实验课程的特点,设计了一个将糖基转移酶和蔗糖合酶偶联制备红景天苷高的本科生物化学与分子生物学实验。首先,将糖基转移酶和蔗糖合酶分别在大肠杆菌中进行异源过量表达,然后将两种酶进行偶联,在糖基供体UDP-葡萄糖的存在下催化底物酪醇生成红景天苷。通过将该实验融入生物化学与分子生物学实验教学,不仅可以增强学生的科学素养和实践能力,还可以提高教学的质量和教学效果。

摘要：概括总结隧道地质预报的地球物理方法 ,介绍地质雷达的特点、现状和探测解释方法 ,分析其影响因素 ,基于对各种地质条件下不同的探测对象而采用不同的解释方法 ,阐述地质雷达的实用性及在隧道施工中的作用。