摘要：在科技迅速发展的时代背景下,教师应利用现代教育信息技术做好《医学遗传学》课程的线上教学设计和教学方法的研究,整合优秀资源,丰富授课内容;精心设计直播内容和交互式环节,以便达到以数据为本,交互为题,直播为用;转变教学主体为学生,充实教学内容,激发学生的学习热情,促进教学与科研的有机融合,进而提高教师教学质量和学生学习成效,以达到锻炼学生科研思维和增强创新实践能力的目的,让学生在需要终身学习的医学科学中获得自主学习的能力,并且能将自主学习的“内化”知识灵活地转变为临床工作中真实情境的“外化”能力,以期能够应对环境变化对人类的各种影响以及各种突发情况的出现,从而保障高等医学教育高质量地顺利进行,培养出创新型应用人才。

摘要：为培养具有较强的实践操作能力的专业型人才,尤其是医学相关专业的学生,实验教学是必不可少的教学环节,为促进教育信息化与实验教学的融合,推进高等教育内涵发展,需要建立适合于实验教学的混合式教学模式。以提高课程教学效果为出发点,以培养有专业知识素养和较强实践操作能力的创新型人才为目标,通过雨课堂平台中融合慕课资源和虚拟仿真操作平台的项目训练的课程教学设计,可回避慕课和虚拟仿真实验在独立应用中的不足,这种线上融合式实验课程的开展能够使慕课(massive open online course,MOOC)与虚拟仿真实验实现优势互补,高效地完成教学目标,有力地推动实验教学课程的改革进程,能够最大限度地提升学生自主学习、独立思考的能力,利用汲取的知识和获得的能力解决问题,从而实现课程教学目标。

摘要：试验旨在从牛瘤胃微生物中筛选出能够合成并分泌蛋氨酸的菌株。试验以草原红牛瘤胃液为样品,使用蛋氨酸缺陷培养基分离纯化,通过革兰氏染色、游离蛋氨酸含量测定、16S rDNA测序等鉴定菌株。采用单因素设计和正交试验对培养基和发酵条件进行优化,通过体外模拟瘤胃发酵试验测试菌株。结果显示,分离的菌株为热带假丝酵母菌(Candida tropical TYM001)。该菌株最适碳源为20.0 g/L葡萄糖,最适氮源为10.0 g/L无氨基酸酵母,最适无机盐为5.0 g/L NaCl、7.0 g/L MgSO_(4)和5.0 g/L KH_(2)PO_(4)。在最适发酵条件下,游离蛋氨酸含量达到27.815 mg/L。研究表明,该菌株能够提高体外模拟瘤胃总蛋白和游离蛋氨酸含量,为开发反刍动物微生物添加剂提供参考。

摘要：为制备鼠骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(sk MLCK)多肽抗体,根据NCBI Gen Bank中报道的sk MLCK的一级结构信息,利用TMHMM2.0和DNA Star软件分析此蛋白的跨膜结构域、二级结构、亲水性、疏水性等,以及综合分析考虑抗体设计的其他相关因素,设计出一段14个氨基酸的多肽。将合成后的多肽同牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,将BSA偶联后的sk MLCK多肽免疫新西兰大白兔,3个月后采集血清,亲和纯化抗sk MLCK多肽抗体。ELISA法检测效价,Western blot和免疫荧光法检测抗体特异性。结果得到了高效价和高特异性的鼠sk MLCK多肽抗体,ELISA法测定其效价可达到1∶128 000,并可用于免疫荧光和Western blot的研究,为后续研究sk MLCK基因提供物质基础。

摘要：根据GenBank中报道的鸡黑素皮质素受体-4(melanocortin-4 receptor,MC4R)一级结构信息,用TMHMM 2.0和DNAstar软件分析MC4R蛋白的跨膜结构域、二级结构、疏水性、亲水性以及抗原性等,综合考虑抗体设计的其他因素,设计出1段15个氨基酸的多肽。将合成后的多肽与牛血清白蛋白(BSA)偶联,用与BSA偶联的MC4R多肽免疫新西兰兔,3个月后获取血清,亲和纯化出抗MC4R多肽抗体。通过ELISA法检测效价,Western blot和免疫组化法检测抗体特异性。通过该方法得到了高效价与高特异性的鸡MC4R多肽抗体,ELISA法测定其效价可达到1∶128 000,而且该抗体可用于免疫组化,说明所制备的鸡MC4R抗体具有高特异、高效价等特点,将为鸡MC4R基因的功能研究提供物质基础。

摘要：为了构建猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(sk MLCK)基因有效短发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体,筛选出最佳干扰效率的序列,采用RNAi技术,设计并合成3条siRNA干扰序列,插入到慢病毒穿梭质粒(h U6-CMV-puror-Ploy A)上,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,收集病毒上清并进行病毒滴度的测定,将其转染小鼠C2C12细胞,分别用实时定量PCR和Western blot方法检测细胞中sk MLCK基因mRNA和蛋白的表达。结果显示:PCR扩增和测序分析结果显示靶向sk MLCK RNAi慢病毒载体构建成功;转染小鼠C2C12细胞后,sk MLCK基因mRNA和蛋白均受到不同程度抑制,实时定量PCR显示,抑制率分别为(29.2±4.43)%、(76.4±7.33)%、(20.0±1.8)%;Western blot显示,抑制率分别为(29.6±5)%、(42.4±1.6)%、(34.3±1.2)%。结论:成功构建猪sk MLCK基因有效shRNA的慢病毒载体,确定干扰载体-2(sk MLCKRNAi-2)具有最佳干扰效果,证实sk MLCK基因RNAi慢病毒载体能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为进一步研究该基因与肌肉肉质性状的关系奠定了基础。

摘要：根据GenBank中报道的鸡GABA(A)α1一级结构信息,用TMHMM 2.0和DNAstar软件分析GABA(A)α1蛋白的跨膜结构域、二级结构、疏水性、亲水性以及抗原性等,综合考虑抗体设计的其他因素,设计出一段16个氨基酸的多肽。将合成后的多肽与牛血清白蛋白(BSA)偶联,用与BSA偶联的GABA(A)α1多肽免疫新西兰兔,3个月后获取血清,亲和纯化GABA(A)α1多肽抗体。通过ELISA法检测抗体效价,Western blot和免疫组化法检测抗体特异性。通过该方法得到了高效价与高特异性的鸡GABA(A)α1多肽抗体,ELISA法测定其效价可达到1∶128 000,而且该抗体可用于免疫组化,说明所制备的鸡GABA(A)α1抗体具有高特异、高效价等特点,将为鸡GABA(A)α1基因的功能研究提供有用的研究材料。

摘要：根据NCBI GenBank中报道的鸡阿黑皮素原(Pro-opiomelanocortin,POMC)一级结构信息,用TMHMM 2.0和DNA Star软件分析POMC蛋白的跨膜结构域、二级结构、疏水性、亲水性以及抗原性等,综合考虑抗体设计的其他因素,设计出1段12个氨基酸的多肽。将合成后的多肽与牛血清白蛋白(albumin from bovine serum,BSA)偶联,用与BSA偶联的POMC多肽免疫新西兰兔,3个月后获取血清,亲和纯化出抗POMC多肽抗体。通过ELISA法检测效价,Western blot和免疫组化法检测抗体特异性。通过该方法得到了高效价与高特异性的鸡POMC多肽抗体,ELISA法测定其效价可达到1∶128 000,而且该抗体可用于免疫组化,说明所制备的鸡POMC抗体具有高特异、高效价等特点,将为鸡POMC基因的功能研究提供有用的研究材料。

摘要：为了构建猪MEF2C基因的RNA干扰重组质粒,并筛选出最佳干扰效率的序列,本试验采用RNAi技术,设计并合成了3条针对猪MEF2C基因的RNA干扰序列,构建了RNA干扰重组质粒(命名为siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3),将其转染到小鼠C2C12细胞,并用实时定量PCR检测细胞中MEF2C基因mRNA的表达,Western blot测定细胞中MEF2C基因蛋白的表达。结果表明:重组质粒经PCR扩增后显示产物大小与预期一致,产物经双酶切及测序鉴定该序列与NCBI提供的序列一致。重组质粒转染C2C12细胞后,MEF2C基因mRNA表达受到不同程度抑制,抑制率分别为(33.67±2.51)%、(21.00±3.60)%、(71.67±4.04)%。Western blot结果表明MEF2C基因蛋白表达受到不同程度抑制,抑制率分别为(47.33±0.05)%、(38.25±0.16)%、(67.27±0.12)%。本试验成功构建猪MEF2C基因干扰重组质粒,最终确定干扰质粒(siRNA-3)具有最佳干扰效果,证实MEF2C基因的干扰质粒能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为探讨该基因与肌肉肉质性状的关系提供理论基础。

摘要：为制备猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(skMLCK)的特异性单克隆抗体,设计合成多肽并与载体蛋白偶联,经细胞融合、培养基筛选、阳性细胞的检测与单克隆化后,获得3株能稳定分泌抗skMLCK单克隆抗体的杂交瘤细胞株;种植BALB/c小鼠腹腔,收集腹水,纯化后得到skMLCK的单克隆抗体。分别应用高效液相色谱、质谱和Western blot对纯化单克隆抗体进行抗体纯度、效价和敏感性检测。结果显示:获得的猪skMLCK单克隆抗体,能特异性识别skMLCK纯化蛋白、猪肌肉组织的内源性蛋白。本试验成功制备了能特异性结合猪skMLCK的单克隆抗体,这为今后进一步研究探讨skMLCK对猪肌肉发育的影响提供物质基础。