摘要：目的构建粉尘螨6类变应原(Dermatophagoides farinae,Derf6)基因的高效原核表达载体,并进行表达、纯化及生物学功能分析。方法根据Derf6基因已知序列,设计1对引物,通过对纯培养的粉尘螨提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增出Derf6基因片段,PCR产物克隆入pMD18-T载体,转化大肠埃希菌(***10),经PCR和酶切鉴定并测序。将上述所得阳性克隆菌株扩大培养,碱裂解法提取质粒,所得重组质粒pMD18-T-Derf6和空质粒pET-24a同时用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,经纯化后连接并转化至***10。构建的重组质粒pET24a-Derf6经PCR、酶切和测序鉴定后,再转化至***21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Westernblotting)鉴定其表达效果,用Ni+离子亲和层析柱纯化重组质粒pET24a-Derf6表达产生的组氨酸重组蛋白。结果构建了重组质粒pMD18-T-Derf6和pET24a-Derf6。SDS-PAGE结果表明Derf6基因在***21(DE3)中获得良好的表达,所得重组蛋白相对分子质量(Mr)为31000,与理论值一致,经亲和层析纯化后,SDS-PAGE结果显示单一条带。该蛋白以尘螨过敏患者血清进行Westernblotting,结果表明具有良好的IgE结合活性。结论克隆、表达并纯化了具有良好尘螨致敏患者IgE结合活性的Derf6。

摘要：变幅杆是超声辅助加工中的重要零部件之一,用于辅助加工的变幅杆通常带有工具头负载,研制存在一定难度。通过对带负载的用于超声辅助磨料射流的变幅杆研究分析,在使用解析法设计其初始结构尺寸的基础上,借助有限元软件选择节点耦合方式进行仿真,采用控制变量的原则获得各结构参数对系统频率的影响,修整变幅杆装配体模型,经过试验测定,发现该种处理方式及修整方法获得的仿真结果与实际测定相比,谐振频率误差在1%以内,振幅测定误差在2%以内,为研制带有复杂工具头的变幅杆提供了参考。