摘要：目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）PBP2a的原核表达及其免疫源性的鉴定。方法根据基因文库登录的mecA基因的编码序列，设计合成了一对寡核苷酸引物，将mecA基因的70～2006bp克隆至pET28a载体，转化***21（DE3）；经IPTG低温诱导表达后，利用镍琼脂糖凝胶亲和层析技术纯化目的蛋白；用抗PBP2a抗体鉴定纯化蛋白的免疫源性。结果成功构建了不合跨膜区的PBP2a原核表达载体，在低温诱导条件下获取的蛋白纯化后无杂蛋白；该蛋白能与商品化抗PBP2a单克隆抗体结合。结论利用分子克隆技术，获得了高纯度的不合跨膜区的PBP2a蛋白，且该蛋白具有免疫源性，为进一步制备抗PBP2a单克隆抗体奠定了基础。

摘要：目的研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a(PBP2a)的原核表达,及PBP2a多克隆抗体的制备。方法根据基因文库登录的mecA基因的编码序列,设计合成了1对寡核苷酸引物,应用PCR法从MRSA基因组中获得编码PBP2a全长的DNA,将此目的基因片段克隆至pET32a(+)载体,转化***21(DE3);经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,利用Ni2+亲和层析技术纯化目的蛋白;用目的蛋白免疫小鼠3～8次后,收获血清并鉴定。结果成功构建了PBP2a原核表达载体,并获得了高效表达;利用纯化的蛋白制备了理想的多克隆抗体。结论利用分子克隆技术,获得了高纯度的PBP2a蛋白并制备了多克隆抗体,为其进一步研究奠定了基础。