摘要：目的探索转化生长因子-β3(TGF-β3)在辐射致肺上皮细胞损伤中的作用及其可能机制,为放射性肺损伤的防治提供实验依据。方法设计合成并筛选Ⅱ型转化生长因子-β受体(TGFBR2)的小干扰RNA(siRNA),用于细胞TGFBR2干涉;将体外培养的人支气管上皮细胞(Beas-2B细胞)及其TGFBR2干涉细胞随机分为对照组、5 ng/ml TGF-β3处理组(TGF-β3组)、6 Gy60Co-γ射线单次照射组(6 Gy组)、6 Gy60Co-γ射线单次照射+5 ng/ml TGF-β3处理组(6 Gy+TGF-β3组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组胶原蛋白和TGFBR2的表达,RT-qPCR和Western印迹检测上皮间质转化(EMT)相关标志物平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期。结果(1)TGF-β3对辐射诱发的细胞胶原蛋白表达增高有明显抑制作用,并可降低辐射所致细胞EMT相关标志物α-SMA基因和蛋白水平的异常高表达,有效保护辐射所致肺组织细胞纤维化改变;(2)TGF-β3可抑制辐射诱导的细胞TGFBR2异常高表达,并对辐射诱发的细胞凋亡和细胞周期G2/M期阻滞均有明显保护作用;(3)对细胞TGFBR2干涉后,TGF-β3对辐射所致细胞凋亡和细胞周期G2/M期阻滞的保护作用丧失,抑制辐射所致肺上皮细胞损伤。结论TGF-β3通过TGFBR2保护辐射损伤的肺上皮细胞。

摘要：目的观察不同浓度的艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383活性和吞噬功能的影响。方法在细胞增殖实验中,将艾烟冷凝物染毒浓度分别设计为:0、0.004、0.008、0.012、0.016、0.020 g/L,以上述不同浓度的艾烟冷凝物对NR8383进行细胞染毒,染毒时间分别为12、24、36、48h,然后采用CCK-8法对细胞增殖情况进行检测;吞噬功能实验中,艾烟冷凝物染毒浓度设计同上,对NR8383进行细胞染毒24 h后,采用流式细胞仪检测吞噬率。结果艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞进行染毒12 h后,各实验组的细胞存活率虽都高于空白对照组,但各实验组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。染毒24、36 h后,实验组浓度为0.004、0.008、0.012、0.016 g/L时,各组细胞存活率不仅高于空白对照组,且各实验组与空白对照组差异有统计学意义(P0.05)。染毒48 h后,除浓度为0.008 g/L的实验组外,其余各组细胞存活率与空白对照组差异有统计学意义(P<0.05)。艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒12、24、36、48 h后,NR8383细胞存活率随着艾烟冷凝物浓度的升高均呈现先增加后降低的趋势,且随着作用时间的延长,细胞存活率亦随着艾烟冷凝物浓度的增高而先增加后降低。艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒24 h后,NR8383细胞的吞噬功能随着艾烟冷凝物浓度的升高而增强。除浓度为0.004g/L的实验组外,其他各组与空白对照组差异均有统计学意义(P<0.005,校正卡方值)。结论在一定浓度范围内,艾烟冷凝物可提高大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的活性和吞噬功能,并呈现一定的浓度及时间依赖性。

摘要：目的:构建人N-α-乙酰基转移酶10(N-α-acetyltransferase 10,Naa10)基因有效的慢病毒RNAi载体并转染人口腔鳞癌细胞SCC-15,研究其对口腔鳞癌细胞生长的影响。方法:根据人Naa10基因mRNA序列设计合成3个siRNA片段,转染人口腔鳞癌SCC-15细胞株并进行验证,将最有效的干扰序列克隆至pLV-shRNA载体上,测序正确后进行包装,测定病毒颗粒滴度后,将慢病毒感染SCC-15细胞以测定Naa10的表达情况,并通过生长曲线研究干扰Naa10对SCC-15细胞生长的影响。结果:3个靶点的siNaa10均能有效抑制Naa10基因的表达,其中2号靶点最为有效(P<0.005);重组RNAi质粒pLV-shNaa10经测序证实构建成功,pLV-shNaa10可在293T细胞中成功包装;测定病毒颗粒LV-shNaa10、LV-NC滴度分别为1.2×10~9 TU/mL和1.0×10~9 TU/mL;SCC-15细胞感染LV-shNaa10后,Naa10蛋白表达明显降低(P<0.005);干扰Naa10可促进人口腔鳞癌细胞SCC-15的生长。结论:成功构建了Naa10shRNA慢病毒表达载体,感染人口腔鳞癌细胞SCC-15后,有效抑制了内源性Naa10基因的表达,干扰Naa10可促进SCC-15细胞的生长。

摘要：目的探讨谷胱甘S-转移酶P1(GSTP1)与放射性肺损伤关系及相关机制。方法应用人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)细胞,针对GSTP1 mRNA序列设计筛选两条有效的RNA干扰;转染后为实验组(siRNA-1、siRNA-2),转染阴性对照siRNA者为阴性对照组(NC)。蛋白免疫印迹法(WB)检测GSTP1蛋白表达;1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)检测GST酶的活性;DCFH-DA探针孵育,利用流式细胞术检测活性氧平均荧光强度(MFI);Annexin-v/PI染料孵育,利用流式细胞术检测细胞凋亡;MTT法检测细胞活性,并绘制生长曲线;WB检测上皮间充质转化(EMT)相关指标。结果照射后活性氧检测MFI实验组较阴性对照组高(6774.66±399.60∶8759.00±256.96∶9 967.67±735.11,P<0.05)。实验组凋亡细胞比例较阴性对照组高(12.3±1.16∶17.38±1.65∶22.88±1.20,P<0.05);MTT法测吸光度(A)值实验组较阴性对照组低;实验组EMT程度高于对照组细胞。结论干涉肺上皮细胞GSTP1蛋白表达,照射后会提高细胞内活性氧水平、凋亡细胞比例,并进一步降低细胞增殖速率,此外肺上皮细胞的EMT发生更加显著。GSTP1蛋白含量下降可能导致辐射诱导肺细胞损伤加重,并促进EMT发生。