摘要：目的探讨抑制opticin蛋白表达对牛玻璃体细胞与视网膜色素上皮（RPE）细胞共培养胶原凝胶收缩系统的调控作用。方法实验研究。设计并转染OPTC-shRNA质粒至体外培养的牛RPE细胞，通过免疫印迹法检测转染后3、5、7dopticin蛋白的相对表达量和抑制率。在牛I型胶原凝胶内加入牛玻璃体细胞和RPE细胞，构建细胞共培养的胶原凝胶体外收缩模型。实验共分为6组：OPTC-shRNA质粒转染RPE及玻璃体细胞组（A组）、空质粒转染RPE及玻璃体细胞组（B组）、未转染RPE及玻璃体细胞组（c组）、仅含未转染RPE细胞组（D组）、仅含玻璃体细胞组（E组）以及不含任何细胞空白对照组（F组）。应用One—wayANOVA、SNK-q检验和单因素回归分析比较各组凝胶收缩差异，并分析A、B、C组玻璃体细胞数的差异对胶原凝胶收缩性状的影响。结果成功构建并转染了有显著抑制作用的OPTC—shRNA质粒至牛RPE细胞。免疫印迹法检测结果显示，opticin蛋白表达抑制率在转染后3、5、7d分别为（83．91±2．88）、（84．71±4．27）、（82．85±2．72）％，差异无统计学意义（F=1．15，P〉0．05）。胶原模型构建后3d，A、B、C组中不同密度（2×10^7、1×10^8、5×10^8个／L）亚组玻璃体细胞密度凝胶收缩率分别为A组：（23．52±2．08）、（56．00±1．02）、（61．62±1．73）％；B组：（16．56±2．01）、（36．41±1．33）、（49．56±1．75）％；C组：（15．75±1．37）、（37．45±1．14）、（48．45±1．97）％，D、E组凝胶收缩率分别为（12．18±0．95）、（10．95±0．93）％，F组未观察到凝胶收缩。在相同玻璃体细胞密度下A、B、C组间凝胶收缩性两两比较，2×10^7个／L细胞密度：A组与B组、A组与C组间差异有统计学意义（q=11．38、12．72，P值均〈0．05）；B组与C组间差异无统计学意义（q=1．34，P〉0．05）；1×10^8个／L细胞密度：A组与B组、A组与c组差异有统计学意义（q=48．83、46．22，P值均〈0．05）；B组与C组差异无统计学意义（q=-2．61，P〉0．05）；5×10^8个／L细胞密度：A组与B组、A组与C组间差异有统计学意义（q=48．83、46．22，P值均〈0．05）；B组与C组间差异无统计学意义（q=1．74，P〉0．05）。A、B、c各组内不同玻璃体细胞密度之间凝胶收缩性两两比较（2×10^7个／L与1×10^8个／L、2×10^7个／L与5×10^8个／L、2×10^7个／L与2×10^7个／L）：A、B、C3组内各细胞密度之间差异均有统计学意义（A组：q=-55．97、-65．66、-9．69；B组：q=-34．53、-57．41、-22．88；C组：q=-41．94、-63．19、-21．25；P值均〈0．05）。进一步对组内不同玻璃体细胞密度与对应的凝胶收缩率进行回归分析，结果显示，共培养模型的凝胶收缩率与其中的玻璃体细胞密度呈一定的正相关性（A、B、C组r=0．919、0．981、0．937，P值均〈0．05）。D、E、F组凝胶收缩率两两比较，D组与E组、D组与F组、E组与F组差异均有统计学意义（q=54．87、49．33、5．54，P值均〈0．05）。结论opticin蛋白可调控牛玻璃体细胞与RPE细胞共培养胶原凝胶收缩性状。

摘要：目的 构建针对大鼠opticin表达基因（OPTC）的特异性小发夹RNA（shRNA）真核表达质粒.方法 用DNA重组技术将针对大鼠OPTC基因不同位点所设计的4个shRNA序列克隆到真核表达 质粒中.根据构建的4对质粒设置shRNA-1组、shRNA-2组、shRNA-3组、shRNA-4组,同时只加转染试剂不加质粒的细胞设为正常对照组,转染阴性质粒的细胞为阴性对照组.用脂质体lipofectimine 2000将4个shRNA质粒分别转染至体外培养的原代大鼠睫状体非色素上皮（NPE）细胞,转染后采用半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测OPTC基因的mRNA及opticin蛋白的相对表达量和抑制率.结果 各组质粒转染大鼠NPE细胞后,shRNA-1、shRNA-2、shRNA-3、shRNA-4组细胞OPTC mRNA相对表达较正常对照组均明显下调（F=10.239,P=0.000）,各组OPTCmRNA抑制率为85.7%、62.87%、54.87%、48.77%.各质粒干扰组细胞opticin蛋白表达较正常组均有不同程度下降（F=17.870,P=0.000）,各组opticin蛋白抑制率为78.7%、34.6%、31.1%、16.8%.结论 OPTC基因干扰质粒shRNA-1可以有效抑制大鼠睫状体NPE细胞opticin的表达.