摘要：本研究旨在建立一种灵敏、快速检测猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。参照GenBank中PDCoV有关基因序列,设计一对特异性引物用于扩增PDCoV M 基因。将测序正确的基因片段克隆入pMD18-T载体,构建重组质粒作为建立标准曲线的病毒模板。设计合成一对特异性引物与TaqMan探针,进行反应条件和反应体系的优化,建立快速检测PDCoV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法,并进行该方法的灵敏性、特异性与重复性验证。结果表明,该方法能有效扩增1.0×10^1 ~1.0×10^9 拷贝·μL^-1 的PDCoV标准质粒,建立的标准曲线呈现良好的线性关系。该方法的检测灵敏度为1.0×10^1 拷贝·μL^-1;对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪伪狂犬病病毒等病原不发生交叉反应,具有很好的特异性;重复性试验结果显示变异系数(CV)小于1%,重复性良好。对2017—2018年期间收集的河南省不同猪场的100份腹泻病料进行检测,PDCoV的阳性检出率为23%(23/100),与PDCoV SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的符合率为100%。人工感染PDCoV的仔猪,取攻毒后不同时间的粪便样品,应用本研究建立方法与常规RT-PCR方法对样品进行检测,TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的灵敏度远远优于常规RT-PCR。上述结果表明,本研究所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法能够灵敏、特异地检测PDCoV,可用于临床PDCoV的检测。

摘要：本文主要展示了一个基于bootstrap技术的新媒体公益平台的设计与实现过程。该设计方案包括以网站首页、志愿组织、志愿社区等为主要模块的网站前端界面设计,以及对用户注册、登录,个人信息,组织信息,活动信息的发布等进行数据修改和管理的后端管理设计。主要使用HTML5、bootstrap、PHP和mysql等技术对网站进行开发。项目运行表明,平台在不同的终端设备使用流畅,使用界面简洁美观,符合预期设计期望。

摘要：人行地下通道不仅在一定程度上保证了交通安全,解决了区域交通问题,而且是城市交通系统的重要部分。本文通过对人行地下通道空间和公共艺术的调查,研究其两者之间存在的关系,以及如何再设计符合人文需求、可持续发展的地下通道公共艺术空间,同时,从侧面发掘出人行地下公共通道与一定区域地区文化的结合。

摘要：试验旨在对猪SUMO特异性蛋白酶1(sentrin-specific protease 1,SENP1)基因CDS区进行克隆和生物信息学分析,并探讨SENP1基因在乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染PK15细胞后的表达情况。根据GenBank中公布的猪SENP1基因预测序列(登录号:XM_013997974.2)设计特异性引物,通过RT-PCR和T/A克隆技术对猪SENP1基因CDS区序列进行克隆测序,并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR分析猪SENP1基因在JEV感染PK15细胞不同时间点(0、12、24、36、48 h)的表达情况。结果显示,猪SENP1基因CDS序列全长2034 bp,共编码677个氨基酸。序列比对和系统进化树分析结果表明,猪SENP1蛋白序列和山羊、犬、人、牛的相似性分别为94.8%、94.2%、93.9%和93.8%,说明在这些物种中SENP1的保守性较强;猪与犬的SENP1分子亲缘关系较近。生物信息学分析结果显示,猪SENP1蛋白相对分子质量为76825.76,等电点为8.53,体外半衰期为30 h,不稳定系数为53.59,总平均亲水指数为-0.622。SENP1蛋白不含信号肽序列,无跨膜结构域。二级结构分析结果显示,SENP1蛋白中α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角分别占31.31%、46.68%、16.25%和5.76%。三级结构分析结果显示,猪SENP1蛋白中存在8个α-螺旋区和7个β-转角区。实时荧光定量PCR结果显示,猪SENP1基因在JEV感染的PK15细胞中呈现上调表达趋势,其中在感染后48 h SENP1基因表达量显著高于对照组(P<0.05)。本试验结果为后续深入研究SENP1基因功能提供了参考。

摘要：目的对南京大学医学院附属鼓楼医院国家药物临床试验机构临床研究协调员(CRC)的工作现状进行调研分析,以期为促进CRC职业快速健康成长,为建立适合我国国情的CRC管理体系提供参考。方法设计调查问卷,对参与鼓楼医院药物临床试验项目的 CRC进行以下三个方面的调研:(1)医院CRC的职业等级评估;(2)医院CRC工作难点的调查;(3)CRC对医院药物临床试验发展的意见建议,并对调查结果进行统计分析。结果共发放问卷35份,回收30份,回收率85.71%。调查显示,该院CRC以中青年居多;大多数CRC有医药相关背景,其中药学专业和护理专业分别占53.36%和39.97%;CRC在该院负责的研究项目数量集中在2~3个;聘任模式多元化,由现场管理组织(SMO)派遣的CRC所占比例最大,达到73.33%。在日常工作中有高达83.33%的CRC认为与该院医技辅助科室沟通最为困难。CRC结合在其他医院的工作心得提出完善各专业培训文件夹、修订CRC的管理制度及标准操作程序(SOP)、机构网站协助发布受试者招募信息等意见建议。结论多种CRC聘用形式共存影响机构对CRC的统一管理。检查检验项目手工申请的滞后方式和研究者的低配合度给CRC在该院开展工作带来了困难。该院CRC的聘任模式将会逐步调整为与固定的SMO公司共同建设,同时将加快建设受试者检验检查电子管理系统的步伐。

摘要：目的调查上海市宝山区7～12岁儿童变应性鼻炎自报患病率并分析其相关危险因素。方法 2010年3～6月,选择宝山区5所小学一～五年级(7～12岁)学生为研究对象,设计"宝山区儿童变应性鼻炎问卷调查表",进行流行病学调查。对结果进行统计学处理。结果发放问卷总数为3046份,回收2464份,应答率80.9%,有效问卷2313份。宝山区7～12岁儿童变应性鼻炎自诉现患率为23.9%(553/2313),其中男26.1%(314/1203),女21.5%(239/1110),有统计学意义(x^2=6.627,P<0.01)。自报患病率随年龄增长而上升。在变应性鼻炎的危险因素中,被动吸烟、家养宠物、居住环境、湿疹史、个人过敏史、家族过敏史可能与变应性鼻炎有一定相关性。结论宝山区7～12岁儿童变应性鼻炎自报现患率为23.9%。初步了解宝山区变应性鼻炎流行病现状,为上海变应性鼻炎防治提供参考。

摘要：为建立合理的紫苏栽培技术,采用田间随机区组设计,设置30cm×20cm、25cm×20cm、20cm×20cm等3个不同种植密度,设置有机肥、复合肥、混合肥(有机肥+复合肥)3种施肥方式以及移栽、直播2种种植方式,探讨不同栽培方式对紫苏精油含量和产量的影响。结果表明,种植密度、施肥与种植方式显著影响紫苏地上部生物量,以高密度复合肥直播的紫苏生物量最高,为12 056kg·hm-2;密度、施肥、种植方式显著影响紫苏精油含量,以低密度施用复合肥直播的紫苏精油含量最高,达0.417%;紫苏精油产量受施肥、种植方式影响,但在不同种植密度间无显著差异,以低密度混合施肥直播的紫苏精油产量最高,达41.0kg·hm-2。因此,低密度、混合施肥、直播有利于紫苏精油高产。