摘要：根据国外发表的人致病性大肠杆菌fimC基因序列,在其保守区设计了带有BamHⅠ/HindⅢ酶切位点的一对引物,应用PCR技术以鸡致病性大肠杆菌O2基因组DNA为模板扩增到一个片段,大小约为700bp,将扩增产物克隆到pMD18＿T载体上,并转化于大肠杆菌TG1宿主菌,经酶切和筛选,得到阳性重组质粒。通过对阳性重组质粒核酸序列测定,确定此DNA片段为鸡大肠杆菌fimC基因。

摘要：根据猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)标准毒株 (Purdue- 115 )的ORF6(N基因 )的基因序列 ,设计合成了一对引物Li0 1/Li0 2 ,用反转录聚合酶链反应 (RT -PCR)技术对发病猪的粪便进行检测。结果得到与预期大小相一致的约 1174bp(N基因 )的PCR产物 ,与从参照毒株TGEVTH - 98扩增出的片段大小相一致。进一步用限制性内切酶进行分析 ,发现从发病猪粪便中扩增出的N基因与参照毒株TH - 98株具有相同的限制性内切酶图谱 ,从而证实本病例致病病毒为TGEV。

摘要：用猪肾细胞 (pK - 15 )繁殖猪瘟病毒 (CSFV)分离株HL -LY ,根据基因库已发表的CSFVE2 基因序列 ,设计并合成一对引物 ,以CSFV总RNA为模板 ,通过RT -PCR技术扩增出约 1.1kb的片段 ,即E2 基因。将RT -PCR产物克隆到 pMD18-T载体上 ,构建了重组质粒T -E2 ,经酶切、PCR鉴定和序列测定 ,表明均已成功获得了CSFVE2基因的重组体T -E2 。将该测序结果与国内几个毒株SHIMEN ,C ,C -V -LZ ,GS -LT ,GS -LX分别进行序列同源性比较 ,核苷酸同源性分别为 96 .5 9% ,96 .0 0 % ,88.4 9% ,78.2 4 % ,77.82 % ;氨基酸同源性分别为 99.4 6 % ,98.39% ,93.5 4 % ,90 70 % ,90 .4 4 %。

摘要：用猪肾细胞 (PK- 15 )繁殖猪瘟病毒 (CSFV)分离株 HL - L Y,根据基因库已发表的 CSFV E2 基因序列 ,设计并合成一对引物 ,以 CSFV总 RNA为模板 ,通过 RT- PCR技术扩增出约 1.1kb的片段 ,即 E2 基因。将 RT- PCR产物先克隆到 p MD18- T载体上 ,构建了重组质粒 T- E2 ,再通过双酶切亚克隆到表达载体 p PIC9的多克隆位点 (MCS)上 ,经酶切、PCR鉴定和测序分析 ,表明均已成功获得了 CSFV E2 基因的重组体 p PIC9- E2 。将该测序结果与国内几个毒株 SHIMEN,C,C- V- L Z,GS- L T,GS- L X分别进行序列同源性比较 ,核苷酸同源性分别为 96 .5 1% ,95 .5 3% ,89.12 % ,78.6 6 % ,77.2 3% ;氨基酸同源性分别为 97.32 % ,95 .71% ,89.5 4 % ,83.16 % ,83.4 2 %。表明该毒株与国内标准毒株 SHIMEN株和

摘要：将猪流行性腹泻病毒分离株HLJ0 2 ,经过胰酶处理后 ,在Vero细胞上增殖。利用Gen Bank中的基因序列设计合成了 2对M基因引物 ,应用RT PCR和RT nestedPCR分别扩增出HLJ0 2的 85 4bp的M全基因片段和 41 2bp的M基因部分片段 ,而在猪传染性胃肠炎病毒中和Vero培养液中未扩增出上述产物。结果表明 ,RT nestedPCR可用于检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)。

摘要：本实验对鸡大肠杆菌 O2 血清型菌株进行 iss基因克隆测序 ,并在此基础上设计出两对套式引物 ,分别对含信号肽的iss基因序列和不含信号肽的 iss基因序列进行扩增 ,并与原核表达载体 p GEX- 6 p- 1连接进行原核表达。iss基因克隆测序的结果与两组国外发表的 iss基因序列进行比对 ,其同源性达 1 0 0 %。SDS- PAGE鉴定显示融合蛋白获得了较理想的表达 ,融合蛋白分子量分别约为 36 k D和 33k

摘要：本研究登录Genbank对猪圆环病毒2型基因的序列进行分析,用Primer 5.0设计了ORF2基因的扩增引物,试图选择一种比较合理的PCR方法检查PCV2感染的病原,以期这种PCR方法可以有效分析猪综合征障碍病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒的扩增(HCV)、猪伪狂犬病毒(PRV)等比较常见的病原。研究结果表明,在PCV2进行扩增阳性样品检测中,发现一条异常447 bp的DNA条带,对产物测序结果进行扩增分析,证明其是PCV ORF2基因序列。敏感性检验分析表明检测样本DNA浓度时达到了9.8×10^(-4)ng/μL。PCR实验具有良好的稳定性和重复性。根据对66例临床病猪的分析表明,在PCV2的检测中阳性感染率是27.26%,这可能受到HCV、PRRSV、PRV、PPV等多种病毒的感染,其中混合感染的比例达到了72.23%。

摘要：目的为获得大量的单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lmo)溶血素(Hemolysin,hly)蛋白,以便研制Lmo诊断试剂及其在疫苗研制方面的作用。方法本文应用Primer Premier 5.00设计引物,引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,以前期合成构建的pMD18-T-hly质粒为模板,通过PCR方法扩增出Lmo 0586株溶血素基因。相应酶切后,克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建pGEX-6p-hly重组质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达。带有重组质粒pGEX-6p-hly的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE及免疫印记分析。结果PCR体外扩增hly基因产物大小约为1 624bp,成功构建了重组表达质粒pGEX-6p-hly;SDS-PAGE显示蛋白表达带的分子量约为72ku,重组蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的20.8%;Western免疫印记表明具有良好的反应原性。结论在国内首次构建重组质粒pGEX-6p-hly,并以融合蛋白的形式进行了高效表达,同时该蛋白具有特异的抗原反应性,为研制Lmo诊断试剂及其在疫苗研制中的作用奠定了基础。

摘要：用PCR方法克隆了山羊痘病毒疫苗株(GTPV-TY)的TK基因,根据TK基因结构,设计了2对引物分别扩增得到与TK基因部分相邻的长度约1 kb的同源重组臂序列,分别插入到pGEM-T easy载体,通过SmaⅠ位点重新连接,并在此位点插入CMV启动子、多克隆位点、BGH polyA信号以及LacZ基因,构建了通用山羊痘病毒TK基因缺失转移载体pdTK。此转移载体为改造GTPV-TY株以及开发二价或多价基因工程疫苗奠定了基础。

摘要：根据文献 ,设计和合成内外两对扩增猪流行性腹泻病毒M基因的引物 ,应用嵌套式RT PCR技术检测病猪群的粪便 ,扩增出 85 4bp和 4 12bp的目的基因片段。表明导致猪群发病的病毒为PEDV。