摘要：光声成像技术是一种集光学成像与声学成像技术优势为一体的无创成像手段。这种成像手段具有高的空间分辨率及深层组织穿透性能,在生物医学研究及临床应用领域中展现出巨大的应用潜力。近年来,为提高光声成像的实时诊断能力,研究者们开发了一系列刺激响应型光声成像探针,用于体内特定生物学事件的动态可视化示踪。该综述从刺激响应型光声探针的设计策略出发,并以内源性刺激源(如pH、酶、自由基等)及外源性刺激源(如光、温度、超声等)为分类,重点介绍当前光声成像在体内的研究进展。同时,对激活型光声成像技术的未来发展趋势进行展望,为光声成像探针的开发提供了参考。

摘要：目的筛选表达Tim-3的人呼吸道相关细胞株,为进一步阐明Tim-3可能与人呼吸道疾病相关奠定基础;构建pEGFP-C2-hTim-3真核表达载体,以期用于hTim-3的功能研究。将测序正确的重组质粒pEGFP-C2-hTim-3转染入人支气管上皮细胞株16HBE中,筛选出阳性细胞克隆,为后续实验提供理论基础。方法用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基于37℃5%CO2饱和湿度培养箱中体外培养人呼吸道相关细胞株16HBE、A549和GLC-82,调整细胞到最佳状态,对数生长期时收集细胞,抽提总RNA,逆转录为cDNA。参照人GenBank中Tim-3基因的全长序列,使用Primer5.0设计并合成其引物,采用PCR检测以上3种细胞Tim-3的mRNA。将健康人外周血Tim-3基因全长cDNA片段克隆入真核表达载体pEGFP-C2,经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,构建包含目的基因Tim-3的重组质粒pEGFPC2-hTim-3。利用脂质体介导pEGFP-C2-hTim-3质粒和pEGFP-C2质粒分别转染16HBE细胞,荧光显微镜下观察16HBE细胞的瞬时转染效率,并采用含G418的培养基筛选以获得整合pEGFP-C2-hTim-3和pEGFP-C2的阳性细胞克隆,用荧光显微镜观察pEGFP-C2-hTim-3和pEGFP-C2在16HBE细胞上的定位表达。结果 1)PCR显示人呼吸道相关细胞株16HBE、A549和GLC-82均表达Tim-3 mRNA;2)构建了具有筛选特征和能够稳定表达的pEGFP-C2-hTim-3质粒载体,测序结果与预期设计完全一致;3)瞬时转染后经荧光显微镜检查可见表达pEGFP-C2-hTim-3绿色荧光蛋白的16HBE细胞不足8%,表达pEGFP-C2绿色荧光蛋白的16HBE细胞不足15%。采用G418筛选后获得表达野生型hTim-3和外源性pEGFP-C2-hTim-3的16HBE细胞及转染pEGFP-C2空质粒的16HBE细胞,经荧光显微镜观察前者定位在胞膜上,后者定位于胞质中。结论人呼吸道相关细胞株16HBE、A549和GLC-82均表达Tim-3mRNA,Tim-3可能与人类呼吸道疾病的发生和发展相关。成功构建了真核表达载体pEGFP-C2-hTim-3并获得了高表达pEGFP-C2-hTim-3的16HBE阳性克隆细胞,可供后续研究使用。

摘要：医学检验技术作为一门实践性极强的学科,从传统的实验教学模式向虚拟仿真实验教学模式的过渡和转变,已然成为高校医学检验技术专业教学改革的新方向和新趋势。文章从基层教师角度,对医学检验技术专业传统实验教学的局限性、虚拟仿真实验教学的作用和发展现状进行了总结,并着重从项目设计、项目内容和教学方法、教学评价体系等方面进行了思考,提出了“病例引导式医学检验技术虚拟仿真实验库”的构建设想,以及基于该设想建立不同类型疾病间的网络式学习,以促进医学检验技术专业虚拟仿真实验教学水平的不断提高。

摘要：目的克隆人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)基因cDNA,构建其真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,并转染16HBE细胞。方法根据GeneBank中人TIM-4 cDNA序列(编号:NM-138379.2),设计出带有EcoRI和BamHI的上下游引物,应用RT-PCR技术,从人骨髓中扩增出TIM-4基因编码区序列,克隆到pMD18-T载体,形成pMD18-T-TIM-4重组质粒,经菌落PCR,双酶切,测序鉴定获得人TIM-4基因cDNA片段,然后将其亚克隆入pEGFP-C2绿色荧光载体中,并通过菌落PCR,双酶切,测序鉴定其重组体。将测序正确的pEGFP-C2-TIM-4质粒转染人气道上皮细胞(16HBE),用实时定量PCR检测目的基因的表达。结果成功扩增出人TIM-4 cDNA全长1134 bp,经T-A克隆构建的pMD18-T-TIM-4重组质粒经菌落PCR,双酶切,测序证实载体中含有正确的TIM-4编码区片段。由此构建的真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,经菌落PCR扩增出1134 bp左右的片段,经双酶切后产生4.7 kb和1134 bp左右的2条带,DNA测序显示与GeneBank中人TIM-4 cDNA序列一致。重组质粒转染16HBE细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,经实时定量PCR分析,转染细胞TIM-4基因的表达显著增加。结论首次从人骨髓中扩增出TIM-4基因cDNA全长,构建了其真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,并在16HBE细胞内成功高表达,为进一步研究TIM-4的生物学功能奠定了基础。

摘要：目的:针对BMI-1基因的不同部位构建4种不同的BMI-1 shRNA真核表达载体,转染人宫颈癌细胞系Hela并筛选其有效序列。方法:应用DNA重组技术将针对人BMI-1基因的不同部位所设计的4对shRNA序列克隆到真核表达质粒psi RNA-hH1neo中,构建BMI-1 shRNA表达载体BMI-1 shRNA1、BMI-1 shRNA2、BMI-1 shRNA3和BMI-1 shRNA4,用阳离子脂质体介导转染Hela细胞以筛选其有效序列。结果:4个BMI-1 shRNA表达载体BMI-1 shRNA1、BMI-1 shRNA2、BM-1 shRNA3和BMI-1shRNA4经测序鉴定证明插入正确。②在Hela细胞中转染BMI-1 shRNA2和BMI-1 shRNA4能显著下调BMI-1mRNA表达,抑制率分别为59.9%和67.4%(P<0.01)。结论:成功构建了真核表达载体BMI-1 shRNA1、BMI-1 shRNA2、BMI-1 shRNA3和BMI-1 shRNA4,其中BMI-1 shRNA2和BMI-1 shRNA4能有效地抑制BMI-1在Hela细胞中的表达。本工作为今后研究BMI-1在肿瘤基因治疗中奠定基础。

摘要：本研究构建真核表达载体pEGFP-BMI-1并观察其在HeLa细胞中的表达。将BMI-1逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)产物克隆入pEGFP-N1,经酶切、PCR鉴定及测序分析,构建pEGFP-BMI-1真核表达载体;采用脂质体转染法,将融合基因pEGFP-BMI-1转入HeLa细胞,用荧光显微镜和Western blot检测其表达,SYBR Green I实时定量RT-PCR方法检测转染前后HeLa细胞中P16INK4a mRNA的表达变化。结果表明:重组后的pEGFP-N1质粒已成功载入BMI-1的全长编码基因,序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜下可见在转染pEGFP-BMI-1的HeLa细胞中存在荧光分布;Western blot检测发现存在外源性融合蛋白BMI-1-EGFP的表达。在HeLa细胞中过表达BMI-1显著下调P16INK4a mRNA的表达为对照组的9.2%(P<0.01)。结论:成功构建了真核表达质粒pEGFPBMI-1,转染HeLa细胞后可表达融合蛋白BMI-1-EGFP。这为今后研究BMI-1在肿瘤发生发展中的机制奠定了基础。

摘要：我在一次与学生的色彩课中．在黑板上写了“水彩”两个字：其中“水”字顶天立地，“彩”字只有一点点。这其实写出了我对水彩画的了解和理解：水彩如玉，水是关键，彩是颜色，点入其中；于是造就了一块块翡翠和一幅幅好画。

摘要：目的:建立SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR定量检测人POT1基因的方法。方法:依据人POT1基因及参照基因TBP基因序列设计引物,以人类乳腺癌细胞系MCF-7总RNA逆转录合成的cDNA为模版,以TBP基因为参照基因,应用SYBR GreenI实时荧光定量PCR检测POT1基因的表达。结果:POT1和TBP基因熔解曲线为单峰,无杂峰及二聚体。POT1基因及参照基因TBP基因扩增效率相同(直线斜率0.0171<0.1)。POT1基因批内变异与批间变异分别为1.3%和2.1%;TBP基因批内变异与批间变异分别为1.2%和2.6%。结论:建立了SYBR Green Ⅰ实时定量检测人类POT1基因的方法,该方法简单快速,经济,灵敏度高,特异性和重复性好,可用于人类POT1基因的定量分析。