摘要：目的:应用小干扰RNA(siRNA)沉默树突状细胞(DCs)CD40分子的表达,观察其对大鼠炎症性肠病(IBD)的影响。方法:设计并合成高效的siRNA载体及真核表达载体pcDNA3-CD40,分别转染入大鼠DCs细胞。采用PCR和Western blotting法检测DCs中CD40mRNA及蛋白表达水平。18只Wistar大鼠采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)建立IBD大鼠模型,分为对照组、干预组及过表达组。对照组大鼠给予生理盐水腹腔注射;干预组大鼠给予含有干涉表达载体pSilencer 4.1-CMV neo-CD40的DCs腹腔注射;过表达组大鼠给予含有pcDNA3-CD40的DCs腹腔注射。15d后观察各组大鼠的腹泻、黏液脓血便等临床症状。结果:成功构建RNA干涉载体并转染DCs,PCR及Western blotting法检测DCs中CD40mRNA及蛋白表达水平均下调。转染后的DCs作用于各组大鼠,与对照组比较,干预组大鼠的腹泻、黏液脓血便症状得到明显改善;过表达组大鼠腹泻、黏液脓血便情况加重,并有2只大鼠死亡。结论:siRNA干预DCs中CD40分子的表达对大鼠IBD具有治疗作用。

摘要：目的研究Bcl-2、C-Raf及双靶点的RNA干扰质粒对人结肠癌HCT-8细胞株增殖的抑制作用。方法利用Ambion公司网上设计软件,分别以Bcl-2和C-Raf为靶标,设计合成63个核苷酸的双链RNA,构建质粒pSilencer3·1-H1/Bcl-2、pSilencer3·1-H1/C-Raf及pSilencer3·1-H1/Bcl-2/C-Raf,分别转染结肠癌细胞株HCT-8,用MTT法检测其对细胞增殖的抑制作用,RT-PCR检测Bcl-2和C-Raf的mRNA转录。结果经MTT法检测,构建的Bcl-2和C-Raf基因及双靶点RNAi质粒3个转染组的细胞存活率均降低,双靶点质粒转染组较两个单靶点转染组细胞存活率明显降低,差异有显著意义。经RT-PCR检测,转染双靶点质粒后,HCT-8细胞中Bcl-2和C-Raf基因的表达均较对照组明显减弱。结论Bcl-2、C-Raf及双靶点RNAi质粒对HCT-8细胞株增殖有抑制作用。