摘要：分别采用2.1、6.0μm的大孔有机整体柱为载体,制备固定化胰蛋白酶反应器(MITRs),比较不同方案对固定化得率及酶比活的影响.相较于氰基硼酸,以2-甲基吡啶硼烷为还原剂的固定化方案虽提高了酶的比活,但导致固载量减少了32%~50%.此外,孔径大小对酶的比活无显著影响.MITRs可有效水解β-乳球蛋白,且水解效率随着循环流速的增加而提高.其中使用2.1μm-MITR的水解产物主要为相对分子质量小于3 ku的小肽.在18次重复实用过程中,6.0μm-MITR表现出更高的稳定性,具有较高的重复利用性.

摘要：目的:利用分子生物学的方法克隆梅花鹿超氧化歧化酶(Cu,Zn-SOD)基因,并将其于大肠杆菌(***)中表达。方法:通过设计扩增引物及RT-PCR技术从梅花鹿肝细胞中克隆出Cu,Zn-SOD基因,将其构建于表达质粒pET21a(+)并转入*** Rosetta(DE3)。结果:通过IPTG诱导表达,在Rosetta(DE3)中成功表达出具Cu,Zn-SOD活性的梅花鹿超氧化物歧化酶,三角摇瓶发酵水平约257U/ml发酵液;经过纯化后得到比活3092U/mg的梅花鹿超氧化物歧化酶。结论:获得了梅花鹿的Cu/Zn-SOD基因的全序列,并使其得到表达,对研究鹿茸的功效和保护梅花鹿这一物种具有一定意义。

摘要：【目的】从海洋来源的罗尼氏弧菌菌株BY中克隆得到一个具有琼胶酶活性的新基因,并对其进行重组表达。【方法】对实验室保藏的产琼胶酶菌株BY进行16S r RNA基因序列分析,并构建系统发育树。根据已报道的琼胶酶基因序列的同源性,设计简并引物,利用降落PCR(Touch-down PCR)及染色体步移技术扩增琼胶酶基因序列全长,对基因序列进行生物信息学分析。将目的基因插入p ET22a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),对重组酶进行表达,利用DNS法测定了重组酶的酶活,对该重组琼胶酶酶学性质进行研究。【结果】克隆得到一条新的琼胶酶基因,命名为Vibrio ***(Gen Bank登录号:AIW39921.1),Vibrio ***基因序列全长2 232 bp,编码744个氨基酸,理论分子量为85 k D,Vibrio ***的氨基酸序列基因库中与已知的琼胶酶氨基酸序列Vibrio ***3的相似度为86%。发酵液琼胶酶酶活力为71.73 U/m L,证明表达的蛋白为琼胶酶。酶学性质研究表明重组琼胶酶的最适温度及p H分别为50°C和7.0,并且具有较好的稳定性。【结论】利用染色体步移技术克隆得到一条新的琼胶酶基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了重组表达,为琼胶酶的应用奠定了基础。

摘要：在修建长输管道中,弯管是管道平面转向或竖向变坡较好的构成形式。冷弯后的钢管防腐是施工中的一大难题。近期进行的带二、三层(多层)结构防腐钢管的冷弯试验,为今后在管道建设中大量采用冷弯技术提供了重要依据。这种冷弯管已在国内矿浆、输气管道中应用,开创了带二、三层结构防腐钢管进行冷弯工艺的先例;节省了管道建设投资,提高了管道施工质量。