摘要：目的了解我国血吸虫病流行省(直辖市、自治区)血吸虫病防治机构能力建设现状。方法2023年5-6月,通过专家研讨及现场访谈、实地走访等方式了解各类血吸虫病防治机构职责任务和建设要求,设计血吸虫病防治能力维持和巩固专题调查问卷。采用问卷星APP对我国承担血吸虫病防治和监测任务的县级、市级及省级卫生机构开展线上问卷调查,分析我国血吸虫病防治机构分布、血吸虫病防治任务承担机构、部门和员工数量及血吸虫病防治科研转化情况;以通过中国合格评定国家认可委员会(China National Accreditation Service for Conformity Assessment,CNAS)认可为实验室有能力开展相应检测工作,分析血吸虫病防治机构检测能力水平。结果累计收到我国12个血吸虫病流行省(直辖市、自治区)的486家血吸虫病防治机构的有效问卷,其中2.5%(12/486)为省级机构、15.8%(77/486)为市级机构、81.7%(397/486)为县级机构;77.4%(376/486)为疾病预防控制中心或公共卫生中心,21.0%(102/486)为血吸虫病、地方病或寄生虫病防治专业机构,1.6%(8/486)为医院、卫生院或其他。486家血吸虫病防治机构共有在职员工37713人,其中血吸虫病防治相关员工5675人。省、市、县级机构血吸虫病防治相关员工数占机构在职总人数的比例分别为5.9%(231/3897)、5.5%(566/10134)和20.6%(4878/23682)。累计有专职血吸虫病防治员工3826名,其中年龄≤40、41~50岁及>50岁员工比例分别为30.5%(1166/3826)、34.6%(1324/3826)和34.9%(1336/3826);血吸虫病防治工作年限>25年专职员工占41.0%(1571/3826);初、中级职称分别占35.5%(1358/3826)和33.7%(1290/3826),18.6%(712/3826)的血吸虫病防治专职员工不具有专业技术职称。血吸虫病防治机构最核心的3项血吸虫病防治工作任务分别为钉螺控制(26.3%,374/1420)、疫情监测与管理(25.4%,361/1420)及健康教育(18.8%,267/1420)。各级血吸虫病防治机构具备的血吸虫病检测技术中,改良加藤厚涂片法、尼龙绢袋集卵孵化法及间接红细胞凝集试验(indirect hemagglutination test,IHA)占比较高。具备酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、胶体染料试纸条法(dipstick dye immunoassay,DDIA)、金标免疫渗滤试验(dot immunogold filtration assay,DIGFA)、环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)等检测技术能力或实验条件的实验室比例均<50%。2018—2022年,我国血吸虫病防治机构累计承担血吸虫病防治科研项目211项,总经费1859.6万元;累计发表论文619篇;参与制定血吸虫病防治相关标准13项;申请相关专利113项,获批101项;成果转化4项。结论我国血吸虫病防治机构中,独立血吸虫病防治专业机构比例较低、实验室检测能力有待提高、员工年龄结构较老化且职称构成偏低。应加大血吸虫病防治投入和工作力度,加强血吸虫病防治机构能力建设和人才培养,为高质量开展血吸虫病消除工作提供有力支撑。

摘要：目的建立永生化的人巩膜成纤维细胞系,并利用转录组测序分析永生化的影响。设计实验研究。研究对象实验组为永生化人巩膜成纤维细胞,对照组为原代人巩膜成纤维细胞。方法采用携带SV40 T基因质粒及lenti-Mix慢病毒包装质粒,利用磷酸钙转染法转染HEK293T获得慢病毒颗粒。用获得的慢病毒颗粒转染原代细胞,暴露于含有1μg/ml嘌呤霉素中2天,存活的细胞继续在培养基中体外培养至25代,获得永生化的人巩膜成纤维细胞系。之后,对永生化前后的细胞进行RNA提取及测序,分析永生化细胞与原代细胞转录本特性。使用DESeq包分析差异基因,并使用Clusterprofiler进行基因本体(GO)分析。主要指标细胞形态、胶原蛋白相关基因表达量和转录本相关性。结果永生化人巩膜成纤维细胞保持了原代细胞的形态,并呈现显著增强的增生能力,成功培养20代以上。永生化细胞与原代细胞的转录组高度相似,RNA测序显示两者相关性为r2=0.995。基于DESeq包的差异基因分析显示转录本共比对出22930个基因及33691个异构体,其中有2063(3.6%)个基因的表达呈上调趋势,2776(4.9%)个基因的表达呈下调趋势。GO功能分析结果显示,上调的基因主要聚集在DNA复制、细胞分裂等细胞基础代谢活动及与病毒的相互作用,下调的基因主要富集于细胞外基质调节与细胞间连接等通路。细胞外基质相关基因通路中,编码胶原蛋白、纤维蛋白基因转录略微下调(log2倍数变化=-0.4~-3.1),COL1A1转录量下调3.34倍。结论本研究中利用慢病毒转染法通过导入SV40T外源基因的方式构建了永生化的人巩膜成纤维细胞系,与原代细胞相似性高,稳定性好,可为巩膜相关实验提供充足的研究材料。