摘要：目的:研究miRNA的敲除对全反式维甲酸(ATRA)介导的急性早幼粒细胞白血病髓系分化的影响,并鉴定下调的miRNA若干,设计合成针对miRNA前体基因序列的sgRNA,通过CRISPR/Cas9技术实现miRNA在编码基因水平上的敲除。实时荧光定量PCR验证miRNA水平的变化和流式细胞术检测miRNA敲除后对细胞分化水平的影55种成熟miRNA下调。应用CRISPR/Cas9进行基因敲除后,PCR及Surveyor assay检测可见明显的DNA剪切条带,后,细胞的髓系分化受到明显抑制,而敲除miR-155后髓系分化水平则有所上调。结论:应用CRISPR/Cas9可进行针对平的影响,其具体机制是通过对分化相关靶基因的综合调控。

摘要：目的弥散性轴索损伤(DAI)是颅脑外伤中常见的病例类型,主要由旋转冲击造成,可引起患者认知、行为、情感障碍或死亡。现有技术DAI模型具有瞬时单次、混合线和旋转运动、接触性撞击产生其他局灶病等的缺陷,本研究开展了新的可重复、纯旋转冲击、无其他局灶病的旋转冲击伤DAI动物模型的研制与验证,为DAI损伤机理、损伤耐限/阈值、损伤防护等研究的开展搭建研究平台。方法(1)采用高电频马达旋转直驱方案,带动动物载物台的急启急停,并研制机械系统、PLC控制系统、软件系统、动物固定系统、动平衡配重系统等,通过装配、测试、优化改进、调试等方法,研制旋转冲击伤DAI动物模型。(2)在该DAI动物模型基础上开展动物旋转冲击实验,从磁共振成像(MRI)影像、大体解剖、切片病理技术等几方面研究其损伤情况。结果MRI扫描显示胼胝体损伤,FA降低;大体解剖发现脑膜、胼胝体、大脑皮层与中脑交界处出血灶;用苏木精和伊红染色对脑切片进行病理检查,可发现大脑皮层和脑干的这些区域也出现了细胞水肿、细胞核溶解的现象。结论该旋转冲击伤DAI动物模型设计合理,可引起白质损伤,没有内脏或颅骨等其他病灶伤,可用于多物种动物的旋转DAI实验。