摘要：背景：LIM矿化蛋白1（LIM Mineralization protein，LMP—1）是一种细胞内非分泌蛋白，主要在骨的钙化阶段起作用。目前发现LMP—1可以促进骨形态发生蛋白2和转化生长因子β1等多种蛋白质合成增加，提示其可能通过招募众多的成骨因子共同参与成骨细胞的分化。目的：应用AdEasy腺病毒载体系统构建人LMP-1基因的腺病毒重组体，并检测感染病毒的兔骨髓间充质干细胞LMP-1的表达。设计、时间及地点：开放性实验，于2006—03／2007—02在解放军第三军医大学西南医院中心实验室完成。材料：纯种新西兰大白兔3只，用于分离制备骨髓间充质干细胞。携带人LMP-1基因的pIRES2-EGFP-LMP-1质粒由重庆医科大学附二院骨科保存；AdEasy腺病毒由美国Tong-ChuanHe博士惠赠：人胚肾293细胞由重庆医科大学检验系王宏兵硕士惠赠。方法：以pIRES2-EGFP—LMP—1质粒为模板进行PCR扩增，在下游引物中加入特定序列，使扩增出的LMP—1基因带有编码6个组氨酸（即His标签）的碱基序列，将其作为目的基因，TA克隆后测序。双酶切后插入至腺病毒穿梭质粒pAdtrack—CMV内，经PmeⅠ线性化，在BJ5183菌内与骨架质粒pAdeasy—1的同源重组，构建重组腺病毒质粒pAd-LMP—1。通过脂质体介导在HEK293细胞内包装出复制缺陷的重组腺病毒Ad—LMP—1，扩增纯化后测定滴度，以最佳MOI值体外感染兔骨髓间充质干细胞，行RT—PCR及Western Blot法检测LMP—1表达。主要观察指标：重组腺病毒质粒pAd—LMP-1的鉴定，检测其滴度及感染效率。RT—PCR、Western Blot法检测感染细胞LMP—1 mRNA及蛋白的表达。结果：①测序鉴定携带His标签的LMP—1基因的重组质粒pMD18-T—LMP—1构建成功，包装扩增后获得滴度约3．5×10^9efu／mL的腺病毒重组体Ad—LMP—1。以150的MOI值感染兔骨髓间充质干细胞可以获得最佳感染效率，感染3d后达50％-70％。②病毒感染后的骨髓间充质干细表达LMP—1 mRNA及蛋白。结论：成功构建携带His标签的人LMP—1基因的腺病毒重组体，证实感染重组病毒的骨髓间充质干细胞可有效表达LMP—1。

摘要：中西医结合医学是我国独创的医学体系,在我国医疗健康体系中具有战略地位,是引领医学科学未来发展的生力军。经过近70年的发展,中西医结合学科已初步形成临床体系、科研体系和人才培养体系。中西医结合医学还存在不足之处,在科研和学科建设方面,中西医结合项目资助及相应研究成果相对较少,未形成完备的学科体系;从临床现状和服务效能看,中西医结合服务范围亟待扩大,中西医结合诊疗方案有待增加,服务模式有待完善;在人才培养方面,中西医结合人才仍然严重不足。中西医交叉创新,是解决中西医结合学科发展难题的可能途径,交叉研究是破解中西医结合理论发展难题的关键,中西医结合临床证据是提高临床服务能力的突破口和扩大临床服务可及性的支撑,交叉人才是破解中西医结合发展难题的基础。今后,应加强中西医交叉研究的顶层设计,形成中西医结合研究新体系和新范式;应提高中西医结合临床服务效能和临床服务可及性;应完善体制机制,培养优秀中西医结合人才。