摘要：孕烷X受体(Pregnane X receptor,PXR)是核受体超家族(NRs)中NR1I的重要成员之一,在保护机体免于内源性和外源性物质损伤方面具有重要作用。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立PXR基因敲除的斑马鱼模型,为研究环境污染物的毒性机理及代谢过程提供基础模型。根据PXR基因序列,设计gRNA靶位点,体外转录合成gRNA。同时,将设计合成的gRNA与Cas9 mRNA通过显微注射转入斑马鱼受精卵,经孵化、筛选出有效的突变体,并逐代培养杂交筛选出PXR基因敲除突变体。结果表明利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功敲除PXR基因,经测序分析获得稳定的PXR(+4/+4)基因纯合体。

摘要：本研究通过对剑尾鱼(Xiphophorus helleri)卵黄蛋白原基因片段的克隆和表达,建立了剑尾鱼卵黄蛋白原蛋白检测方法。根据已发表的底(Fundulus heteroclitus)卵黄蛋白原mRNA序列设计引物,利用RT-PCR法扩增出1段1118 bp的剑尾鱼卵黄蛋白原cDNA片段,序列分析表明该片段与其他鱼类卵黄蛋白原基因序列相似性较高,其中与底和食蚊鱼(Gambusia affinis)的同源性分别达87.4%和96.7%。在对该片段所编码氨基酸序列可能抗原位点分析的基础上,进行PCR改造构建原核表达载体,预期得到258个氨基酸的表达蛋白。表达载体转入大肠杆菌DH5α,经热诱导后,SDS-PAGE分析有29 kD的表达蛋白产生,与预期相符。以重组蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗血清。雌激素(β-雌二醇)对剑尾鱼诱导后,用重组蛋白抗血清作一抗,进行Westernblot分析。结果表明,该抗血清能与剑尾鱼卵黄蛋白原特异结合,可应用于剑尾鱼卵黄蛋白原的检测。卵黄蛋白原是环境雌激素研究中较为特异、灵敏的生物标志物,剑尾鱼卵黄蛋白原检测方法的建立,为剑尾鱼环境监测应用提供良好基础。

摘要：为快速准确鉴别检测鳢源致病性舒伯特气单胞菌(***),本实验根据该菌的促旋酶B亚单位基因(gyrB)、溶血素基因(hlyA)的保守序列设计引物,建立了检测致病性***的双重PCR方法。结果显示gyrB和hlyA基因扩增产物分别为601 bp和375 bp;其最低检出菌体DNA量为2.3×10-2ng,最低检出菌数为3×102cfu。特异性试验结果显示,该方法对温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、无乳链球菌、诺卡氏菌、迟缓爱德华氏菌、荧光假单胞菌、柱状黄杆菌、哈氏弧菌以及类志贺邻单胞菌扩增结果均为阴性。应用该方法对37份临床病料样品的检测结果与传统细菌分离鉴定结果的符合率为100%,表明该方法具有良好的特异性和敏感性,可以应用于***的快速检测和流行病学研究。

摘要：2009年10月,广东顺德地区一云斑尖塘鳢养殖场暴发不明病因疾病,发病尖塘鳢体长15—18 cm不等,死亡率约85%,濒死尖塘鳢从池塘底层游至水面,呈现游动失衡状态直至死亡。死亡尖塘鳢腹部膨大,剖检可见肝脏、脾脏、肾脏肿大,有出血斑点,从内脏器官肝脏、脾脏和肾脏未分离到致病菌。病鱼内脏组织研磨过滤除菌后,腹腔注射20尾尖塘鳢,7d后开始出现死亡,10d后全部死亡,对照组无死亡。自然发病鱼和人工感染鱼的病理切片显示肝脏、脾脏和肾脏出现大量肿大细胞,超薄切片经电子显微镜观察,肝脏、脾脏和肾脏观察到大量病毒颗粒。电镜下病毒呈六边形,直径约135 nm,形态与虹彩病毒相似。针对虹彩病毒主衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)序列设计引物,提取自然发病鱼和人工感染鱼的DNA作为模板,均能扩增出预期大小的特异性产物。利用NCBI的Blast搜索,结果显示扩增序列与肿大细胞病毒属的传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)、闪电丽鱼虹彩病毒(DGIV)和条石鲷虹彩病毒(RBIV)MCP核苷酸序列同源性分别为98.8%、98.1%和94.7%。利用MCP序列构建的系统发育树显示,导致云斑尖塘鳢发病死亡的病毒为肿大细胞病毒属虹彩病毒,暂命名云斑尖塘鳢虹彩病毒(MSGIV)。

摘要：根据真鲷虹彩病毒ATP酶基因设计引物，从患暴发性流行病的美国红鱼(Sciaenop ocellatus)脾脏组织中扩增到一条约560bp的特征带。将PCR产物克隆入pGEM-T Easy载体，序列分析表明，PCR产物长563bp，与报道的从真鲷虹彩病毒ATPase基因ORF中扩增出的片段长度一致。PCR产物序列与几种脊椎动物虹彩病毒ATPase基因的ORF序列比较发现，克隆序列与所报道的鱼类虹彩病毒ATPase基因OPF的核心序列的同源性达95．6％以上；与蛙病毒3(FV3)的ATPase基因同源性为40％左右。据此认为引起美国红鱼暴发性流行病的病原为虹彩病毒，暂定名为美国红鱼虹彩病毒(Sciaenop Ocellatus lridovirus，简称SOI)。序列比较和系统树分析表明，我们比较的几种引起鱼类系统性疾病的虹彩病毒很可能是同一类群的病毒，但他们既不属于蛙病毒属，也不属于淋巴囊肿病毒属，可能是虹彩病毒科的一个新类群。

摘要：针对当前城市地下管线管理存在的问题以及BIM技术的应用现状,以广州市某隧道工程迁改项目为例,提出了BIM技术在城市地下管线迁改项目全过程管理中的应用内容及应用方法,并具体阐述了BIM技术在地下管线迁改工作中辅助设计、碰撞核查、工程量统计、自动出图、施工模拟、竣工测量交付等各个环节的应用,最终形成了一套涵盖设计、施工及竣工交付的地下管线BIM全过程应用体系。同时,结合具体案例,针对管线BIM建模效率低,项目工程量统计困难等问题,开发了BIM定制自动化工具,极大提高了管线迁改管理工作的效率,也为后续地下管线BIM应用提供参考和借鉴。