摘要：目的　构建并克隆屋尘螨抗原 Der p2基因 ,在大肠杆菌中初步表达 .方法　根据已发表的 Der p2基因 ,人工设计合成一系列基因片段 ,经单链扩增后连接成完整的 Der p2基因 ;将该基因克隆入表达载体 p Pro EX HTb中 ,测序并进行初步表达 .结果　利用所设计的结构制备了完整的 Der p2基因 ,以大肠杆菌为宿主在 IPTG的诱导下获得初步表达 ,该外源蛋白 Mr约为 17× 10 3,占总蛋白量的 2 0 % .结论　所构建的 Der

摘要：目的采用作为疫苗载体的减毒鼠伤寒杆菌致死性平衡系统 ,构建能异源表达沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)的重组菌株。方法以D型Ct的DNA为模板 ,用所设计的特异性引物扩增编码CtMOMP高变区(VDI～VDIV)基因 ,并将扩增产物定向克隆至质粒pUC19中。序列分析后 ,再亚克隆至与减毒鼠伤寒杆菌X4550互补的质粒pYA3341中 ,以重组质粒转化减毒鼠伤寒杆菌X4550。结果对构建的重组菌以种特异性抗CtMOMP单克隆抗体(mAb)做蛋白印迹表明 ,在相对分子质量(Mr)约为33000处表达有1条带 ,表达量约占菌体总蛋白的13 %。结论成功地构建了能表达MOMP的重组菌株并获得表达。

摘要：目的：为了探讨ＲＴ－ＰＣＲ用于乙脑临床诊断的可行性。方法：根据乙脑病毒Ｅ蛋白基因区设计了３条引物，采用逆转录－半套式－聚合酶链反应（ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法，从实验室到临床应用上，对该方法的敏感性和特异性、临床检测的可靠性进行了探索，并与ＩｇＭＥＬＩＳＡ捕捉法进行了比较。结果：本方法所用引物的敏感性高，特异性强。在此基础上，检测了４７例临床上确诊为乙脑患者的标本（特异性ＩｇＭ阳性），４３例ＲＴ－ｓｅｍ－ｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ结果为阳性，与ＩｇＭ检测的符合率为９１％。在２０例特异性ＩｇＭ阴性、临床上怀疑为乙脑的患者中，１２例ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ结果为阳性，阳性率为６０％。结论：上述结果提示，ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ用于乙脑患者的临床诊断是可行的，若与ＩｇＭＥＬＩＳＡ捕捉法相结合可进一步提高阳性率。另外，对１６例核酸检测阳性的患者进行了追踪检查，结果有１４例患者恢复期标本的ＲＮＡ检测仍为阳性，提示该病毒并未随着症状的消失而立即消失。