摘要：目的:构建并鉴定靶向大鼠gnas基因的小干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体。方法:根据大鼠gnas基因mRNA序列设计并合成3条shRNA特异性寡核苷酸片段,退火形成双链后克隆进入线性化pGenesil-1.1载体,并进行酶切鉴定和测序,同时构建针对大鼠GAPDH基因的阳性对照质粒和不具有基因同源性的非特异性基因的质粒做阴性对照。结果:经酶切和测序鉴定分析,构建的shRNA已成功插入载体,并且与设计序列完全相符。结论:成功构建了靶向大鼠gnas基因的shRNA真核表达载体,为后续研究Gsα蛋白在心力衰竭中作用的体内外实验奠定了基础。

摘要：目的构建并筛选小鼠p300特异性siRNA载体,并观察p300表达降低对心脏特异性转录因子的调控作用,为进一步研究p300介导的组蛋白乙酰化失衡对心脏发育的影响奠定基础。方法针对小鼠p300基因的保守序列区域设计并构建3个重组质粒p300RNAi1,p300RNAi2和p300RNAi3。利用阳离子脂质体将其分别转染入体外培养的乳鼠心肌细胞,分别利用RT-PCR和免疫荧光从mRNA和蛋白水平检测p300表达,判断抑制效率,并检测心脏特异性转录因子GATA4的表达水平。结果 pSOS-HUS组和p300RNAi2组中p300mRNA水平表达较正常对照组无明显降低,而p300RNAi1组和p300RNAi3组中p300mRNA表达量较正常组有明显降低(分别为0.2208±0.0200,0.1708±0.0400,vs0.5095±0.0300),且差别有统计学意义(P<0.05),抑制率分别为56.7%和66.5%。转染p300RNAi1组和转染p300RNAi3组的GATA4mRNA表达水平(分别为0.4231±0.1100,0.2627±0.0800)明显低于正常组(0.8564±0.0700)和阴性对照组(0.8415±0.0400),差别有统计学意义(P<0.05)。结论 p300特异性siRNA质粒载体构建成功,p300RNAi1和p300RNAi3具有确切阻断p300蛋白表达的作用,并下调GATA4的表达。

摘要：教学是教与学统一的互动活动,是教师和学生共同参与的双向活动.师生在教学中存在着大量的知识信息和情感意向的交流,实现师生互动、双向交流的方法很多,其中常用且有效的就是恰到好处进行课堂提问.

摘要：教学是一种培养人的社会实践活动,教学应营造轻松愉快的课堂教学环境,准确定位教学目标,灵活运用教学方法,教育技巧活而不乱,教学氛围有感染力,教学语言有幽默艺术,课堂才能富有创造力,产生事半功倍的教学效果。