摘要：目的克隆旱獭白细胞介素-10(IL-10)全长cDNA序列进行序列分析,为IL-10分子的表达和在土拨鼠肝炎病毒(woodchuckhepatitisvirus,WHV)感染中的应用奠定基础。方法根据Genbank的土拨鼠IL-10cDNA序列,在5′非编码区和3′非编码区设计特异性引物,提取旱獭脾组织总RNA作为模板,RT-PCR扩增旱獭IL-10cDNA。PCR产物纯化后连接至T载体(pMD18-T),构建重组质粒pMD18-T-cmIL-10。对重组质粒进行酶切鉴定,选择阳性克隆测序。对所获得的序列应用分析软件进行分析。结果RT-PCR扩增产物为685bp。重组质粒pMD18-T-cmIL-10经EcoRⅠ与PstⅠ双酶切提示含目的基因片段。序列分析提示旱獭IL-10的编码序列为537bp,与土拨鼠IL-10的同源性为100%。结论成功克隆旱獭IL-10分子,并构建重组质粒pMD18-T-cmIL-10。

摘要：目的对新近建立的乙肝研究动物模型喜马拉雅旱獭3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）的部分cDNA序列进行了克隆和序列分析．为该模型在HBV感染研究中的应用奠定基础。方法根据Genbank的人GAPDHeDNA的序列设计特异性引物．以提取的旱獭脾组织总RNA为模板,RT-PCR扩增旱獭GAPDH cDNA序列。纯化的PCR产物连接至T载体（pMD18-T），然后构建重组质粒pMD18-T-mhGAPDH。对重组质粒进行PCR初筛、酶切鉴定，将阳性克隆测序。对序列进行同源性以及种系进化分析。结果扩增的旱獭GAPDH序列为535bp，编码序列为533bp（nt3-335），编码177个氨基酸。获得的序列和其它类哺乳动物GAPDH的同源性均在88％以上，其中与土拨鼠GAPDH的同源性最高（99．62％），氨基酸序列同源性高达100％。构建种系进化树，分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最接近。结论成功的克隆了喜马拉雅旱獭GAPDH的部分序列。序列分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最近，同源性最高。

摘要：目的 喜马拉雅旱獭对土拨鼠肝炎病毒（woodchuck hepatitis virus,WHV）高度易感,可作为HBV感染的新动物模型.本研究对喜马拉雅旱獭β肌动蛋白（β-actin）的部分cDNA序列进行了克隆和序列分析,为喜马拉雅旱獭在HBV感染研究中的应用奠定基础.方法 根据Genbank的土拨鼠β-actin cDNA的序列设计特异性引物,提取旱獭脾组织总RNA作为模板,RT-PCR扩增旱獭β-actin cDNA序列;PCR产物纯化后连接至T载体（pMD18-T）,构建重组质粒pMD18-T-mhActin.对重组质粒进行PCR初筛及酶切鉴定,选择阳性克隆测序;对所获得的序列进行同源性和种系进化分析.结果 获得的旱獭β-actin序列为349 bp（nt887～1 235）,其中编码序列为323 bp（nt-887～1209）,编码106个氨基酸,包含形成二硫键的2个丝氨酸位点（氨基酸16和氨基酸105）及与β-actin功能相关的2个ATP结合位点、6个凝溶胶蛋白结合位点和6个profilin结合位点.同源性分析发现上述序列与其它哺乳动物β-actin的同源性均高达88 %以上,与土拨鼠β-actin的同源性最高（99.69 %）,其氨基酸序列的同源性为100 %.种系进化树分析提示喜马拉雅旱獭β-actin与土拨鼠β-actin的亲缘关系最近,其次为其它啮齿类动物.结论 成功克隆了喜马拉雅旱獭β-actin的部分序列.序列分析发现喜马拉雅旱獭β-actin与土拨鼠β-actin的同源性最高.