摘要：设计带不同酶切位点的引物,分别用PCR扩增植物内源rbcL基因和2种转基因产品中常见的外源基因-CP4-EPSPS基因和BAR基因,并分别与pGEM-TEasyVector连接,克隆到大肠杆菌DH5α中。提取克隆菌落的质粒,并进行酶切鉴定和序列测定。对3个基因的克隆质粒进行相应的双酶切,回收酶切产物,先后转化到受体载体pCAMBW中。最后获得的重组质粒的酶切和PCR鉴定结果表明3个基因已被成功转化到受体载体中。

摘要：根据Genbank公布的河豚鱼细胞色素b基因序列,应用软件Primer Premier5.00版设计了7对引物,经过PCR筛选,确定可以在所有8个供试河豚鱼样品中检出目的DNA片段的引物HT-1,用于建立河豚鱼的PCR检测方法。对该PCR方法中6个因素包括退火温度、Mg2+终浓度、Taq DNA聚合酶用量、dNTPs终浓度、引物终浓度和模板DNA用量进行优化,确定优化的PCR扩增体系:10×PCR缓冲液2μL,MgCl2终浓度1.5mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0U,dNTPs终浓度300μmol/L,引物终浓度0.2μmol/L,DNA模板400ng,加纯水至总体积20μL。扩增程序定为94℃预变性5min,94℃变性30s,62℃退火30s,72℃延伸30s,40个循环,72℃延伸5min。据此建立河豚鱼成分PCR检测方法,并通过河豚鱼与非河豚鱼的PCR检测结果比较,验证了该方法的河豚鱼特异性。研究结果还表明,该方法的检出限为0.1%,含量为0.1%的河豚鱼样品PCR检出率至少在97.5%以上。

摘要：分别以CTAB法、DNA提取试剂盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊 3种花卉的基因组DNA ,凝胶电泳结果表明试剂盒提取的效果较好 .设计合成了 3对引物 ,分别扩增花椰菜花叶病毒 (Cauliflowermosaicvirus,CaMV) 35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因 (nos)终止子、大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶II(nptⅡ )基因 .普通PCR检测结果表明 ,3种花卉 6个样品中仅矮牵牛的 1个样品含有这 3种转基因成分 ,酶切鉴定结果验证了PCR产物为非假阳性 .尝试以多重PCR同时检测转基因矮牵牛与对照阳性质粒中的 2个或 3个转基因成分 。

摘要：根据15条具有菌株群特异性的SRAP、ISSR、RAPD扩增产物DNA条带测序结果,设计64对SCAR引物,其中6对引物能成功扩增出目的条带,即有6条特异片段(A、C、E、G、H、J)被成功转化为SCAR标记。通过这6个SCAR标记的不同组合,将40个双孢蘑菇菌株分为9个类群和6个类群,与基于SRAP、ISSR、RAPD资料的聚类分析结果的组间距离值取13和16时的分类结果完全吻合。对A片段的SCAR-PCR检测结果是:可从40个双孢蘑菇菌株中鉴别出双孢蘑菇333号菌株(编号01)。

摘要：采用 CTAB微量法和试剂盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊 3种花卉的基因组 DNA,试剂盒提取的效果较好。设计合成了 3对引物 ,分别扩增花椰菜花叶病毒 (Cauliflowermosaic virus,Ca MV) 35 S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因终止子 (NOS!)、大肠杆菌 K12菌株新霉素磷酸转移酶 II(NPTII)基因。 PCR检测结果表明 ,3种花卉中仅矮牵牛的一个样品为阳性 ,含有这 3种转基因成分 ,酶切鉴定结果验证了PCR产物为非假阳性。

摘要：为了筛选可用于检测致病性迟钝爱德华氏菌的毒力基因,最终建立致病性迟钝爱德华氏菌PCR检测体系,根据致病性迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda,*** w.)PPD130/91分离株的6个毒力基因citC、fimA、gadB、katB、mukF、esrB序列,设计了6对引物,进行PCR扩增、引物灵敏度试验及特异性试验。结果显示:在国内分离的3个致病株中同时出现citC、fimA、gadB、mukF4个毒力基因,而katB和esrB毒力基因未出现。各毒力基因单重PCR灵敏度试验中,gadB基因可检测到的模板量为1pg,其余3个毒力基因可检测到的模板量为100pg。在特异性试验中,11株常见致病菌没有扩增出与目的基因大小相近的片段,引物特异性良好。由此推断,citC、fimA、gadB、mukF4个毒力基因中的任意一个,均可作为检测致病性迟钝爱德华氏菌的标志物,但此结论还有待于更多国内分离株的验证。