摘要：在大田生产中,甘薯极易受到甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus, SPFMV)和甘薯矮化退绿病毒(sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)的混合侵染,导致甘薯产量和品质严重下降,因此构建能同时检测SPFMV和SPCSV两种病毒的检测技术体系对甘薯病毒病(sweet potato virus disease,SPVD)的预防具有重要意义。RT-PCR病毒检测技术具有灵敏度高、特异性强的优点。针对SPFMV和SPCSV病毒分别设计4对和3对特异性引物,通过单一RT-PCR检测技术筛选出特异性强的引物和最佳退火温度;在双重RT-PCR检测体系中,针对SPFMV和SPCSV两种病毒的引物浓度组合设置5个处理,优化双重RT-PCR病毒检测技术体系。单一RT-PCR检测结果表明,SPFMVS2/A2和SPCSVS2/A2引物的特异性最强,目的片段大小为461bp,对于SPCSV病毒来说,SPCSVS2/A2引物的特异性最强,目的片段大小为304bp,最佳退火温度为56℃;在双重RT-PCR检测技术体系中,SPFMV/SPCSV的引物组合浓度比为1∶3时,目标片段扩增效果最好。对两种病毒最低检测浓度的测试结果表明,SPFMV和SPCSV两种病毒RNA的最低检测浓度相当于模板RNA浓度的10-4μL。双重RT-PCR检测技术体系的构建,为大田生产中受SPFMV和SPCSV共侵染的甘薯病毒病的预防提供技术支持。

摘要：随着现代分子生物学技术的发展,反转录聚合酶链式反应技术(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)在甘薯病毒检测上的应用越来越广泛,其有灵敏度高、特异性强等优点,采用该技术可检测出甘薯组织中含量极低的病毒RNA。甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus, SPFMV)是导致甘薯发生病害的主要病毒之一,为建立甘薯SPFMV快速检测技术,更好地防止该病毒的发生,本研究根据NCBI GenBank中收录的甘薯羽状斑驳病毒外壳蛋白(CP)基因核苷酸序列的保守区域设计了4对特异性引物,使用天根生化科技(北京)有限公司生产的植物总RNA提取试剂盒、FastQuant cDNA第一链合成试剂盒和2×Taq PCR MasterMix试剂盒,完成特异性引物的筛选并设置不同的退火温度对PCR扩增体系进行优化,确定了甘薯羽状斑驳病毒的RT-PCR检测技术体系。该方法的建立旨在为生产上甘薯SPFMV病毒的快速检测提供技术支持。