摘要：目的探究肿瘤坏死因子受体超族成员6(Fas)调控肝癌细胞株增殖的潜在分子机制。方法收集正常肝细胞LO2和肝癌细胞株Hep3B、Huh7、PLC/PRF/5、Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和SK-hep1,实时荧光定量PCR法检测Fas基因表达,运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析Fas基因表达与肝癌的关系,设计特异性靶向Fas的siRNA,敲低肝癌细胞中Fas基因的表达,通过噻唑蓝(MTT)实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,双荧光素酶实验检测β-连环蛋白(β-catenin)介导的T细胞因子(TCF)/淋巴增强子(LEF)转录活性,蛋白质印迹法检测β-catenin蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测无翅型MMTV整合位点家族成员(Wnt)/β-catenin信号通路下游靶基因八聚体结合转录因子3/4(Oct3/4);G1/S-特异性周期蛋白-D1(CCND1);血管内皮生长因子(VEGF);B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1(Bmi)的表达。结果TCGA肝癌样品中Fas基因表达谱结果显示,肝癌组织Fas mRNA水平显著低于正常肝组织,差异有统计学意义(P<0.001);同时随着肝癌病程的进展Fas基因的表达逐渐下调,且Fas高表达患者的生存率显著高于低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05);肝癌细胞Hep3B、Huh7、PLC/PRF/5、Bel-7402、SMMC-7721中Fas基因表达显著低于正常肝细胞LO2,差异均有统计学意义(t=19.20、19.16、19.20、12.81、7.58,P均<0.05)。与siRNA阴性对照(si-NC)组比较,肝癌细胞HepG2和SMMC-7721转染si-Fas后(si-Fas组)Fas基因表达显著下调,差异均有统计学意义(t=25.20、42.63,P均<0.05);克隆形成明显增多,差异均有统计学意义(t=3.97、3.76,P均<0.05);凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(t=4.76、16.54,P均<0.05);G2/M细胞周期占比更低,差异均有统计学意义(t=11.31、4.09,P均<0.05)。机制研究发现,与si-NC组比较,HepG2和SMMC-7721细胞si-Fas组中Wnt/β-catenin信号通路核心蛋白β-catenin蛋白表达上调,差异均有统计学意义(t=8.67、11.38,P均<0.05);TOPflash相对荧光强度显著增加,差异均有统计学意义(t=5.54、5.06,P均<0.05);Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因Oct3/4、CCND1、VEGF和Bmi表达上调,差异均有统计学意义(t=5.27、5.27、3.59、4.92,6.70、7.73、6.74、7.87,P均<0.05)。结论Fas可通过抑制肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路的激活发挥抑制肝癌增殖的作用。

摘要：本文结合地方应用型本科院校大学英语课程的现状和学生的实际学情,从OBE教育理念的特点入手,以一个单元的教学设计为例,介绍如何将OBE理念融入教学中,旨在探索OBE理念在大学英语教学实践中的应用,探索大学英语教学新模式。