摘要：从表现花叶症状的丁香病株上获得一病毒分离物 ,其在电镜下为约 3 0 0 nm× 1 8nm的杆状粒子 ;电泳分析表明感病组织中 ds RNA大约为 6.4kbp,而其外壳蛋白分子量约为 1 7.6k Da。以上实验结果初步将该病毒分离物鉴定为烟草花叶病毒属 ( Tobamovirus)。根据该属病毒复制酶基因序列设计通用引物 ,进行 RT-PCR检测 ,扩增出约 1 0 0 0 bp的预期特异片段( Gen Bank AY5 6670 3 )。将 PCR产物克隆后测序 ,序列分析表明 ,与从蚕豆中分离的 TMV-B株系序列 ( Gen Bank AJ0 1 1 93 3 .1 )同源性为 99.90 %。根据烟草花叶病毒 ( Tobacco mosaicvirus,TMV)的 RNA CP基因序列设计引物 ,进行 RT-PCR,扩增出约 80 0 bp的预期特异片段 ( Gen Bank AY5 6670 2 ) ,序列分析表明 ,与 TMV-B株系序列 ( Gen Bank AJ0 1 1 93 3 .1 )同源性达99% ,上述实验结果表明 ,该病毒分离物为 TMV。由于该分离物与 TMV-B在指示植物上的症状存在明显差异 ,所以 ,作者把该分离物暂命名为 TMV-S。

摘要：从表现叶斑驳症状的扶桑病株上获得一病毒分离物,电镜下可见约300 nm×18 nm的杆状粒子,其与烟草花叶病毒抗血清呈明显的阳性反应,dsRNA约为6.4 kbp。根据烟草花叶病毒(*** virus,TMV)的RNA序列设计引物,进行RT-PCR检测,扩增出约800 bp的预期特异片段。将PCR产物连接pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,得到了含有目的片段的重组子。序列分析表明,与周雪平等报道的序列(GenBank AJ011933.1)同源性达99％。通过生物学、病毒粒子观察、血清学以及分子生物学实验结果,确定该病毒分离物为TMV。

摘要：根据报道的泡桐丛枝植原体(Paulownia witches'-broom phytoplasma,PaWB)抗原膜蛋白(antigenic membrane pro-tein,AMP)基因的核苷酸序列设计引物,提取发病泡桐总DNA,经PCR扩增并成功克隆泡桐丛枝植原体amp基因。序列分析表明,amp基因由696个核苷酸组成,编码231个氨基酸残基,与GenBank中登录的2个泡桐丛枝植原体的膜蛋白核苷酸序列同源性为100%。将amp基因91-604 nt部分序列(命名为ampd)克隆到原核表达载体pGEX-4T-3,诱导后,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,表明融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达。以纯化的带GST标签的AMPD融合蛋白为抗原免疫德国大白兔,制备了PaWB-AMPD抗血清。利用该血清,通过Western印迹、点印迹、ELISA、间接免疫荧光和免疫捕获PCR试验均能在发病泡桐组织中特异检测到泡桐丛枝植原体。

摘要：从表现叶、环斑症状的河南泡桐病株上获得一病毒分离物,摩擦接种侵染普通烟和苋色藜,与黄瓜花叶病毒抗血清呈弱阳性反应,与烟草花叶病毒抗血清呈阳性反应。分别提取泡桐病叶以及侵染的普通烟总RNA。根据烟草花叶病毒RNA序列设计引物,进行RT-PCR检测,扩增出大约800bp的预期特异片段。将PCR产物连接pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,得到了含有目的片段的重组子,序列分析表明,与GenBank中登录序列号为AJ011933.1同源性达99%。通过生物学、血清学以及分子生物学实验结果,河南泡桐病毒病为烟草花叶病毒(Tabacco m osaic virusTMV)和黄瓜花叶病毒(cucum ber m osaic virusCMV)复合侵染。

摘要：从表现花叶、卷叶症状的大叶白蜡病株上获得一病毒分离物 ,与烟草花叶病毒抗血清呈阳性反应。通过以上试验结果 ,分别提取花叶、卷叶症状白蜡病叶总RNA。根据烟草花叶病毒RNA序列设计引物 ,进行RT -PCR检测 ,扩增出大约 80 0bp的预期特异片段。将PCR产物连接 pMD 18-T载体 ,转化大肠杆菌DH5α,得到了含有目的片段的重组子 ,序列分析表明 ,与GenBank中登录序列号为AJ0 11933.1同源性达 99% ,确定该病毒分离物为烟草花叶病毒 (TabaccomosaicvirusTMV)。

摘要：采用含有激素合成相关基因的根癌农杆菌 ,伤口接种已感染植原体的泡桐丛枝组培苗和健康组培苗 ,结果发现对丛枝苗的致瘤能力明显低于健康对照苗 ,且被接种病苗的丛枝症状缓解。从健苗获得的 T- DNA转化泡桐瘤组织细胞能在无激素培养基上稳定生长和连续继代培养 2年以上 ,说明瘤组织细胞自身已获得了细胞分裂素和生长素合成能力。根据已报道的根癌农杆菌株系p Til5955T- DNA的异戊烯基转移酶基因 ( ipt)的保守序列 ,设计了一对引物 ( CYT和 CYT′) ,用多聚酶链式反应 ( PCR)扩增了我国杨树致瘤农杆菌 ipt基因部分序列 ( 4 2 7bp片段 ) ,也从遗传转化的两个泡桐无性系瘤组织 At- ZH和 At- T35扩增出此特异片段 ,从而进一步肯定了 T- DNA已被整合到泡桐的染色体上 ,表明泡桐易于通过 Ti质粒载体途径进行基因转移操作 ,但用此引物未能从泡桐、甘薯健株和感染植原体的组培病苗扩增出相应的 4 2 7bp特异片段。当用此遗传转化瘤组织嫁接病苗时 ,可减轻丛枝症状的严重度 ,延长病苗的存活时间和诱导病株生根 。