摘要：目的构建并鉴定细粒棘球绦虫（Eg）转基因植物载体重组pBI—Eg95质粒。方法从细粒棘球蚴包囊中分离原头节，经超声粉碎后抽提总RNA，反转录成cDNA，设计合成引物，以cDNA为模板，通过PCR从cDNA中扩增出目的基因Eg95，经电泳及测序鉴定后。将该基因定向克隆到植物表达载体pBI121中构建pBI—Eg95重组质粒，电穿孔转化根癌农杆菌（At）LBA4404株；从转化的At阳性株中抽提质粒进行双酶切和以抽提的质粒为模板进行PCR鉴定。结果RT—PCR扩增出1条约471bp的特异性条带．DNA序列分析与GenBank已知的序列同源性为100％，从转化的At中抽提的质粒，双酶切及PCR测定的结果与预期相符。结论成功构建了细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI—Eg95质粒，为进一步构建细粒棘球绦虫转基因植物疫苗奠定了基础。

摘要：目的构建和鉴定铜绿假单胞菌重组双歧杆菌(rBb)-OprF疫苗。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株提取总RNA为模板,自行设计引物,RT-PCR扩增获得OprF抗原编码基因,经酶切、连接定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprF。转化***21(DE3)感受态细胞,抽提质粒行酶切电泳和测序验证后,电穿孔转化到Bb中,构建铜绿假单胞菌rBb-OprF疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果 RT-PCR扩增出1 016bp的OprF编码基因;重组质粒经双酶切鉴定,切出4 947bp的载体片段和10 16bp的目的基因片段;以rBb抽提质粒为模板进行PCR扩增可得到1 016bp的oprF基因片段。结论成功构建了铜绿假单胞菌rBb-OprF疫苗,为该疫苗的进一步研究奠定基础。

摘要：目的构建和鉴定细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合基因疫苗。方法自行设计引物,从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA为模板,通过RT-PCR分别扩增Eg95和EgA31抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Eg95和EgA31,得到Eg95-EgA31融合基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,定向克隆到大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,构建重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,抽提质粒进行双酶切鉴定,电穿孔法转化两歧双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb),构建细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果RT-PCR扩增出约1 016bp的Eg95-EgA31融合基因;重组质粒用双酶切鉴定可切出预期大小片段,以具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提的质粒为模板进行PCR扩增可得到约1016bp的Eg95-EgA31融合基因片段。结论成功构建了细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,为该疫苗的开发利用奠定了实验基础。

摘要：目的构建和鉴定细粒棘球绦虫（珞）重组双歧杆菌（rBb）-Eg95疫苗。方法自行设计引物，从细粒棘球蚴包囊中分离原头节，超声粉碎后提取总RNA为模板，通过RT—PCR扩增获得Eg95抗原编码基因．采用BamH I和Eco RI双酶切，定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌（***—Bb）穿梭表达载体pGEX—IλT中．转化*** BL21（DE3）感受态细胞，构建重组质粒pGEX—Eg95。抽提质粒进行双酶切鉴定后，电穿孔转化到B6中，构建细粒棘球绦虫rBb—Eg95疫苗，抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果RT—PCR扩增出471bp的Eg95抗原编码基因；重组质粒用双酶切鉴定可切出4947bp的载体片段和471bp的目的基因片段；以具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提的质粒为模板进行PCR扩增可得到471bp的Eg95基因片段。结论成功构建了细粒棘球绦虫rBb—Eg95疫苗，为该疫苗的开发利用奠定了理论基础。

摘要：目的构建并鉴定铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株总RNA为模板,自行设计引物,采用RT-PCR方法扩增OprF抗原编码基因,经酶切、连接后定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprF,转化***21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和鉴定。结果 RT-PCR扩增出1 016 bp的OprF编码基因;重组质粒经双酶切和测序鉴定证实OprF基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析表达产物分子质量单位约为61 ku,与预期结果一致,表达的蛋白质占菌体总蛋白的16%;Western blot鉴定重组蛋白能被Pa外膜粗抗原免疫小鼠血清识别。结论成功构建了铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF,该质粒在***21(DE3)中高效融合表达,表达的融合蛋白具有抗原特异性。

摘要：目的:构建和鉴定卡氏肺孢子菌(Pneumocystis carinii,PC)主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,MSG)表达调控基因上游保守序列(Upstream conserved sequence,UCS)的microRNA表达载体,并在体外转染到PC中观察其对PC的抑制作用。方法:设计并人工合成针对PC MSG-UCS基因的1对microRNA序列并定向克隆到表达载体pcDNA^(TM)6.2-GW/EmGFPmiR上,序列正确的载体用脂质体转染PC细胞,RT-PCR检测其对PC MSG-UCS基因的抑制作用,扫描电镜观察PC的超微结构变化。结果:凝胶电泳和测序鉴定得到的产物与预期的目的基因一致,其在mRNA水平能明显抑制PC的表达并能破坏PC的超微结构。结论:PC MSG-UCS基因的microRNA表达载体pPC-UCSm构建成功,并能在体外抑制PC的表达。

摘要：近年来,关于如何阻止垸外钉螺向垸内扩散问题的研究甚多.本实验则以改变传统的涵闸直接进水方式,即在进水闸口安装悬吊式弯管,实行深层进水,从而达到有效地阻止垸外钉螺进入垸内的目的.现将其现场实验情况和结果报告如下.工程概况安乐潭涵闸位于武汉市汉南区乌金农场,是一座老式双层引水灌溉闸.即在两个闸门之间有一个10m^3的进水池.第一闸外为河滩,有一条长约50m的引水渠,通向通顺河.河滩沿线及引水渠均有钉螺分布.涨水季节,河水自流经涵闸灌入垸内.

摘要：目的:构建和鉴定卡氏肺孢子(Pneumocystis carinii,PC)主要表面糖蛋白(Major surfce glycoprotein,MSG)基因短干扰性RNA(short interfering RNA,siRNA)表达载体。方法:设计并人工合成针对PC MSG基因的短发夹状(Short hairpin RNA,shRNA)序列并定向克隆到siRNA表达载体pTZU6+1上,采用双酶切后凝胶电泳与DNA测序法进行鉴定。结果:酶切和测序鉴定得到的产物与预期目的基因一致。结论:成功构建卡氏肺孢子主要表面糖蛋白基因siRNA表达载体。

摘要：目的:构建并鉴定艾滋病主要机会性感染病原体-卡氏肺孢子(Pneumocystis carinii,PC)主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,MSG)表达调控基因上游保守序列(Upstream conserved sequence,UCS)的短干扰性RNA(Short interfering RNA,siRNA)表达载体。方法:设计并人工合成针对PC MSG-UCS基因的短发夹状(Short hairpin RNA,shRNA)序列并定向克隆到siRNA表达载体pTZU6+1上,采用双酶切与测序法进行鉴定。结果:酶切和测序鉴定得到的产物与预期目的基因一致。结论:成功构建和鉴定PC MSG-UCS基因的siRNA表达载体。

摘要：用日本血吸虫（Sj）成虫提取的总RNA逆转录合成CDNA第一链，并设计合成引物，经PCR扩增，扩增出26kDa的编码区基因，并进行了测序，结果表明Sj中国大陆株（SjC）、Sj菲律宾株（SjP）26kDaGST基因核苷酸同源性99．8％．然后，构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG－Sj26Ⅰ-Ⅳ．再将其依次分别转化大肠杆菌、耻垢分枝杆菌和BCG中，筛选出重组耻垢分枝杆菌疫苗和重组BCG多价疫苗．经SDS－PAGE和薄层扫描分析表明，Sj26kDaGST的表达效率在大肠杆菌、耻垢分校杆菌和BCG中分别占菌体总蛋白的25％-37％、10％－28％、10％－15％．通过酶切图谱、PCR技术和Westernblot分析，证实构建的Sj26kDa基因工程BCG多价疫苗是成功的．用其免疫BABL／c小鼠，结果表明它对日本血吸虫的感染有明显的预防作用，重组BCG多价疫苗的减虫率达27．36％（t=3．42，P＜0．01），减卵率达60．50％（t=6．19，P＜0．01）．实验组虫卵肉芽肿平均面积以及免疫后血清抗体水平与对照组相比其差别具有显著意义．该研究为日本血吸虫成虫疫苗的研究提供了一条新的途径．