摘要：利用正交设计L16(45)对异色瓢虫(Harmonia axyridis Pallas)ISSR-PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物)在4个水平上进行优化试验,试验结果用DPS软件进行分析,建立了异色瓢虫ISSR-PCR反应的最佳体系,即在20μL体系中模板150ng、引物0.5μmol/L、dNTPs0.15mmol/L、TaqDNA聚合酶1.5U、Mg2+1.25mmol/L。并对反应体系进行梯度退火试验,得到最佳退火温度为53.3℃。

摘要：根据报道的十几种昆虫CYP4家族基因的氨基酸序列保守区域设计一对引物,利用RT-PCR技术扩增编码青杨脊虎天牛Xylotechus rusticus中肠细胞色素氧化酶CYP4G2蛋白的cDNA片段,构建原核表达载体pET-CYP4G2,将其转化入大肠杆菌Escherichia coli JM109中表达。序列分析结果表明,该基因（CYP4G2,GenBank登录号为EF429250）保守区域阅读框全长387bp,编码129个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为16.9kD和5.75;推导的氨基酸序列与已报道的昆虫CYP4家族氨基酸序列一致性较高（63%～86%）,且具有细胞色素氧化酶的典型特征。IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳检测到一条22kD大小的外源蛋白,与预测融合蛋白的分子量大小相应。CO差光谱分析证明重组菌表达了有活性的pET-CYP4G2。

摘要：随着时代的发展,中国传统艺术的市场竞争力也越发激烈,音乐类电视节目作为电视艺术的一种形式,把原本的音乐艺术转变为与视听艺术相结合的一种时空同步的艺术。例如中央电视台的《风华国乐》,呈现出了中国传统艺术的表现力,形成了艺术形态与艺术风格的合力,调动了观众的感官,使观众充分感受节目中音乐的内在力量。

摘要：运用单因素和正交试验设计对洋虫超氧化物歧化酶(SOD)的提取工艺进行了优化研究,得到最优的提取条件为:用m(洋虫粉末):V(抽提液)=1g:13mL的0.13mol/LNaCl溶液在28℃下抽提14h。活性可达38.83U/mL,比活力(以蛋白计)可达123.66U/mg。结果表明,NaCl溶液比传统的磷酸盐缓冲液抽提效果更好,其抽提浓度对SOD的提取结果影响最大;同时得到SOD的最佳热变性温度为60℃,时间为15min。

摘要：为了建立洋虫β-actin基因实时荧光定量RT-PCR体系,本实验采用MJ Research OpticonTM 2型实时荧光定量PCR仪,利用SYBR Green Ⅰ染料法,根据GenBank上其他昆虫β-actin基因的保守序列设计引物,对PCR退火温度、引物浓度、模板浓度等各反应因子进行优化,结合扩增曲线和熔解曲线进行分析。结果显示,在20μL体系下,当2×SYBRR Premix Ex TaqTM为10μL时,引物和cDNA模板的最佳浓度分别为1μmol/L和50ng/μL。最佳PCR反应程序为:94℃预变性30s,44个循环包括94℃变性10s,45℃退火30s,72℃延伸40s,最后加做熔解曲线82℃1s。结果表明,在洋虫不同发育时期β-actin基因表达水平基本稳定,因此β-actin基因可以作为洋虫实时荧光定量RT-PCR的内参基因。本研究成功建立了2-ΔΔCT相对定量法的洋虫β-actin基因实时荧光定量RT-PCR体系,并分析了优化PCR反应体系的重要性,建立的洋虫β-actin基因荧光定量RT-PCR方法简便、特异性强,该体系的建立可用于洋虫蜕皮相关基因表达差异的深入研究。