摘要：目的分析解脲支原体(UU)对喹诺酮类耐药基因突变位点及突变类型,为临床筛选新的耐药基因,寻找作用于UU新靶点的抗生素提供理论依据。方法收集临床耐喹诺酮UU标本,提取DNA,用设计的喹诺酮耐药决定区中GyrA、GyrB、ParC,ParE基因特异性引物PCR扩增目的序列并进行测序分析,寻找与耐药相关的突变位点。结果PCR扩增目的基因序列后测序分析,ParC基因是UU喹诺酮耐药的主要突变位点,出现了6个点突变,造成3个位点的氨基酸序列改变;GryA、GryB和Par E基因出现的都是无义突变,氨基酸序列并未改变。结论ParC基因是UU喹诺酮耐药的主要突变位点。临床上应重点针对Par C基因的突变进行相关研究,以降低UU耐药基因突变引起的耐药率上升。

摘要：目的探讨广州从化地区诺如病毒分子流行病学特点,分析从化地区诺如病毒的基因型。方法收集2011年1—12月从化地区腹泻患者标本218份,采用荧光RT-PCR对临床标本进行检测,同时针对诺如病毒ORF2基因区段设计引物,随机选取5株病毒进行ORF2基因序列测定。用ClustalW和MEGA5.0等软件进行序列特性分析和基因型分析。结果 218份临床标本中检测到38份阳性标本,检出率为17.43%。阳性率较高的月份为9、10、11、12月,全年最低检出率的时间为6、7月份(均为0),最高检出率的时间为11月份(32%)。扩增了5株诺如病毒ORF2基因序列,序列分析发现与GenBank中GⅡ组诺如病毒的相似性为76%～98%,与GⅠ组为43%～55%,其中与GⅡ-4组Farmington Hills、Lorsdale、ShanghaiSH52009等株同源性为94%～98%,确认该5株诺如病毒属于GⅡ-4型。进一步的氨基酸序列分析发现与f亚型2006b新变株同源性为97%。结论广州从化地区诺如病毒主要流行季节是冬季,克隆的5株诺如病毒属于GⅡ-4f 2006b型。2011年从化地区以GⅡ-4f2006b新变异株为主要流行株。

摘要：目的建立能同时检测病毒性腹泻患者粪便中星状病毒(astrovirus)、A族轮状病毒(group A rotavir-us)、肠道腺病毒(enteric adenovirus)、诺如病毒GⅠ/GⅡ(norovirus GⅠ/GⅡ)的多重荧光RT-PCR方法。方法根据各病毒基因组保守性序列设计引物和探针,建立多重荧光RT-PCR检测方法。对建立的多重荧光RT-PCR方法进行特异性、敏感性及灵敏性实验,并使用该法对256份病毒性腹泻粪便标本进行检测,同时使用基因测序进行验证。结果成功建立常见腹泻病毒的多重荧光RT-PCR检测方法,对星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、诺如病毒以外的病原体不发生扩增反应。该法检测星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、诺如病毒的灵敏度可达500copies/mL。256份标本中:星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒和诺如病毒阳性率分别为3.12%(8/256)、42.97%(110/256)9、.38%(24/256)和10.16%(26/256),与基因测序方法检测结果符合率达到100%。结论该多重荧光RT-PCR检测方法具有快速、灵敏、特异的优点,可用于临床病原诊断。

摘要：目的建立能同时检测星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒和诺如病毒的多重荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法根据上述4种病毒基因组保守序列设计引物和探针,建立并分析多重荧光RT-PCR的特异性、敏感性、灵敏度;以所建立方法对256例病毒性腹泻患者粪便标本进行检测,同时以基因测序进行验证。结果所建立的腹泻病毒多重荧光RT-PCR检测方法对具有星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、诺如病毒特异性,灵敏度可达500 copy/mL。256例粪便标本中,星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒和诺如病毒的检出率分别为3.13%、42.97%、9.38%和10.16%,与基因测序比对结果相符。结论成功构建可用于常见腹泻病毒检测的多重荧光RT-PCR检测方法,该法具有快速、灵敏、特异等优点,可用于临床病原诊断。