摘要：目的对分离培养的肺炎克雷伯菌菌株进行荚膜分型以判断不同荚膜型在其中的分布。方法对来源于北京地区的肺炎克雷伯菌菌株参照编码肺炎克雷伯菌荚膜多糖基因中一段wzc基因可变区(CD1-VR2-CD2)序列设计引物,运用PCR法扩增目的片段并进行测序,与已发表的荚膜型或NCBI数据库上比对测序结果,最终确定荚膜型别。结果在实验室保存的231株肺炎克雷伯菌中,有210株可用此法进行荚膜分型(分型率为90. 9%);在分出的40种不同的荚膜型中,K47为最常见的荚膜型别,占17. 1%(36/210);其次为K15型,占10. 5%(22/210),其他为K1和K2型,分别占5. 7%(12/210)和6. 6%(14/210)。结论基于荚膜多糖基因wzc可变区序列进行分型的方法操作简单,更有利于不同实验室之间的结果相互比较。另外,K47、K15、K1和K2型为临床肺炎克雷伯杆菌常见的荚膜型。

摘要：布鲁菌外膜蛋白Omp22与布鲁菌致病性相关,又可诱导机体免疫反应。为进一步研究Omp22的特性,对其进行原核表达,并初步鉴定。根据Genbank序列,设计并合成羊布鲁菌外膜蛋白Omp22引物。以羊布鲁菌M5株基因组DAN为模板,PCR扩增并克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中。酶切鉴定正确后,测定序列;将重组质粒pGEX-4T-1-Omp22电转化大肠杆菌DH5α中,诱导表达,并采用羊布鲁菌兔免疫血清,Western-blot初步检测融合蛋白GST-Omp22表达情况和免疫学特性。结果PCR扩增出约660bp目的条带,与预期相符;酶切鉴定和测序结果表明,成功构建了pGEX-4T-1-Omp22原核表达载体;优化诱导温度,结果表明,在25℃诱导表达时,该融合蛋白大部分出现在上清中;Western-blot结果证实,GST-Omp22可与羊布鲁菌兔免疫血清特异性结合。说明成功构建了Omp22蛋白原核表达载体并进行了可溶性表达;该融合蛋白可与羊布鲁菌兔免疫血清特异性结合。Omp22蛋白的表达,为进一步研究布鲁菌的致病机制以及疫苗研制奠定基础。

摘要：目前研究表明整合素β3亚基是多种病毒的细胞表面受体,然而整合素β3亚基与不同病毒受体结合蛋白VAP相互作用的分子机制还不完全清楚。为此,设计引物,采用RT-PCR方法扩增人β3亚基包膜外区约2.1kb片段,克隆入毕赤酵母表达载体pPIC3.5K中。双酶切鉴定挑取阳性克隆pPIC3.5K-β3,测序证实目的基因序列正确。将pPIC3.5K-β3转化毕赤酵母工程菌GS115,在浓度为3.0mg/mL的G418选择培养基上,筛选出含有多拷贝目的基因的阳性菌株,PCR可扩增出约2.1kb的目的条带。阳性菌株经1%甲醇诱导表达,Western-blot可在酵母菌体中检测到约80kDa的目的蛋白条带。上述结果表明,成功构建了人整合素β3亚基毕赤酵母表达载体,筛选获得多拷贝阳性菌株并成功表达,为进一步研究人整合素β3在病毒感染中的作用及其单克隆抗体的制备奠定基础。