摘要：根据已报道乳杆菌胞外多糖生物合成基因的同源性,利用其保守区设计引物,扩增出鼠李糖乳杆菌JAAS8RmlA基因部分序列,并通过染色体步移法扩增出Rml(ACB)的序列。获得了鼠李糖乳杆菌JAAS8胞外多糖生物合成基因4.1 kb序列片段,编码4个可读框。利用BLAST和ClustalX程序对获得序列进行生物信息学分析,预测其结构和功能。结果表明:该序列与已知鼠李糖乳杆菌胞外多糖生物合成基因具有高度同源性,RmlA、RmlC和RmlB基因与dTDP-L-鼠李糖前体的生物合成密切相关。

摘要：本研究根据GenBank中多株鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)磷蛋白磷酸酶(phosphorotein phosphatase,wzb)和多糖共聚酶(polysaccharide co-polymerase,wzd)基因的保守序列信息设计特异性引物,以鼠李糖乳杆菌JAAS8基因组DNA为模板,经PCR扩增获得JAAS8磷蛋白磷酸酶和多糖共聚酶基因的部分序列,利用染色体步移方法(chromosome walking)结合PCR技术获得了参与胞外多糖生物合成的酪氨酸蛋白激酶(tyrosine-protein kinase,wze)、转录调节子(transcriptional regulator,wzr),多糖重复单元转运子(polysaccharide transporter,wzx)和多糖重复单元聚合酶(repeat unit polymerase,wzy)序列,片段长度约8.5kb。生物信息学比对和分析表明,除多糖重复单元聚合酶基因外,其它5个基因预测氨基酸序列与GenBank已报道的乳酸菌胞外多糖生物合成基因簇高度同源,尤其是磷蛋白磷酸酶与鼠李糖乳杆菌HN001的同源性高达99%。对各阅读框功能预测分析表明这6个基因序列主要参与胞外多糖合成过程中多糖聚合、糖链长度检测、多糖转运和输出,为进一步了解乳杆菌胞外多糖生物合成途径和调控机制奠定了基础。

摘要：根据已知乳杆菌胞外多糖生物合成基因的同源性,利用其保守区设计引物,扩增出鼠李糖乳杆菌JAAS8磷蛋白磷酸酶基因(wzb)序列,并通过染色体步移法克隆了鼠李糖乳杆菌JAAS8参与胞外多糖生物合成基因簇全部序列(19.7kb),利用生物信息学方法预测了基因簇16个阅读框的结构和功能。结果表明,该序列与已报道的乳杆菌胞外多糖生物合成基因具有高度同源性。welF、welG、welH、welI、welJ和welE为合成寡糖重复单元的糖基转移酶基因。rmlA、rmlB和rmlC基因与dTDP-L-鼠李糖前体的生物合成密切相关。wzd、wze、wzy、wzx、wzr和wzb基因预测蛋白主要参与胞外多糖合成过程中多糖链长检测、聚合和输出。

摘要：采用80℃热水为溶剂,浸泡提取,采用正交实验设计,以多糖含量为指标,筛选玉竹多糖的提取工艺。玉竹多糖的最佳提取工艺为:加6倍量80℃热水温浸提取3次,每次1h。

摘要：乳酸菌胞外多糖能显著改善发酵乳制品及食品的流变学和质构特性。为进一步了解乳酸菌胞外多糖的生物合成途径及调控机制,本研究对参与植物乳杆菌C88胞外多糖生物合成基因簇的部分序列进行了克隆和鉴定。根据GenBank中已报道植物乳杆菌基因序列的保守区域设计特异性引物,扩增出植物乳杆菌C88生物合成蛋白基因(cps4A)序列,并通过染色体步移方法克隆了植物乳杆菌C88参与胞外多糖合成基因簇的部分序列(4.9kb)。利用生物信息学方法预测基因簇中6个阅读框的结构和功能,结果表明该序列与已报道的乳酸杆菌胞外多糖生物合成基因具有高度的同源性(>96%);对各阅读框功能预测分析发现,这6个基因主要编码参与胞外多糖合成中的多糖合成蛋白、糖链长度检测蛋白、UDP-葡萄糖-4-异构酶和糖基转移酶。本研究将为利用基因工程方法调控多糖的合成和产量提供理论依据。

摘要：假单胞菌是影响原料乳品质的主要嗜冷菌,拟建立一种针对假单胞菌及其耐热蛋白酶的双重PCR检测方法。针对假单胞菌的16S r DNA及apr X基因设计多对引物,利用单PCR反应进行筛选。利用优选的2对引物进行双重PCR反应体系优化,PCR产物的测序鉴定和特异性试验,建立了一种能同时检测分泌蛋白酶的假单胞菌双重PCR方法。用此方法对假单胞菌、肠道常见致病菌进行双重PCR检测,结果表明仅具有蛋白水解活性的假单胞菌在16S r DNA和apr X基因扩增区得到有效扩增,而致病菌和阴性对照在两扩增区均为阴性,表明此检测方法具有特异性。