摘要：斑点杂交技术具有通量高、灵敏度高、检测时间短等优点,且操作方法简单、成本较低、对试验场所和设备要求不高,是适用于广大基层机构的检验技术。目前对于膜芯片的使用和推广还不是特别广泛。本文利用膜芯片技术构建一种肉及肉制品源性食品检测方法,分别设计猪、鸡、兔3种动物的肌细胞线粒体基因的特异性引物,并对3种动物基因组进行PCR扩增,用地高辛对扩增产物进行标记作为膜芯片的标记探针,对标记后的探针进行梯度稀释,选择最适浓度探针与6种动物特异性扩增产物进行斑点杂交试验。结果表明:标记探针在浓度为1pg/μL时仍然显点,与6种动物特异性扩增产物杂交结果显示,标记探针只与对应扩增产物发生显点,不与其他扩增产物反应。说明本研究设计的标记探针灵敏度高、特异性好,可用于猪、鸡、兔3种动物源性膜芯片检测。

摘要：目的:采用环介导等温扩增技术建立铜绿假单胞菌快速检测方法,并用微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)技术进行方法验证。方法:以铜绿假单胞菌rpod基因为靶基因设计引物,建立了果汁饮品铜绿假单胞菌快速检测方法,对于方法的可靠性、特异性和灵敏度,采用ddPCR验证。结果:本实验建立的LAMP快速检测方法显色结果明显,ddPCR检测,以铜绿假单胞菌悬液浓度为横坐标,以数字PCR扩增copy数为纵坐标,生成标准曲线y=0.07497x-9.3516,线性关系良好,R^2=0.9999。铜绿假单胞菌检测范围1.5×10~2~1.5×10~5 CFU/mL;方法灵敏度高、特异性强,标准菌株最低浓度为1 ng/μL;标准差分别为0.57、0.71、4.24、14.8,RSD值在0.66%~22.8%之间。检测果汁饮品128份,126份未显色,显色样品2份,以标准曲线定值,浓度分别为1.64×10~4、2.29×10~2 CFU/mL。

摘要：用斑点杂交技术构建对牛、羊、鸭肉源性成分快速检测的膜芯片方法。在3种动物的线粒体细胞色素b基因上设计特异性引物,对3种动物基因组进行PCR扩增,扩增产物用地高辛进行标记,作为标记探针。将3种动物PCR扩增产物固定到尼龙膜上,再选取3种常见动物作为参照,将其扩增产物一并固定到尼龙膜上。将制作好的膜芯片与标记探针进行斑点杂交试验,来检验标记探针的标记效率和特异性。试验结果表明,标记探针在1 pg/μL浓度下显点清晰可见;3种标记探针分别与6种动物源性扩增产物杂交,结果标记探针只与其对应扩增源性产物发生显点。证明研究设计的膜芯片标记探针具有灵敏度高、特异性强的特点,符合膜芯片检测要求,从而成功构建了一种快速检测牛、羊、鸭3种动物肉源性的膜芯片方法,同时也为动物源性成分检测提供新的依据。