摘要：目的分析我国HIV-1主要亚型毒株的gp120区域的序列特征，并表达出gp120糖基化蛋白，为研究gp120的致病机制和设计疫苗奠定基础。方法利用巢式PCR从来自于不同省份的5名HIV-1感染者外周血单个核细胞DNA中扩增全长gp120基因并测序，对序列特征进行分析，并将获得的gp120基因克隆入真核表达载体，体外表达获得gp120糖基化蛋白。结果序列分析显示，此5条gp120序列分属HIV-1 Thai-B、BC重组和AE重组亚型，虽然亚型不同，但这些gp120序列在相同的位置都存在着一些保守的糖基化位点，且都具备相同的Furin蛋白酶第一切割位点，与参考序列比较发现，不同的HIV亚型序列中，除V3序列长度较为保守外，V1、V2、V4、V5各区域都有不同程度的缺失现象，与BC重组和AE重组亚型相比，Thai-B亚型V3的顶端环呈现出多种组合。最终将这5条gp120序列都克隆入真核表达载体并表达出糖基化的gp120蛋白。结论在设计疫苗和检测试剂时应考虑到膜区的高变性，gp120糖蛋白的体外表达有利于进一步开展针对我国主要HIV流行毒株膜蛋白致病机制和疫苗学的研究。

摘要：目的研究人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)B'亚型vif基因的变异特征,探讨其与HIV传播和致病性之间的关系。方法采集河南省部分HIV感染者的外周血,提取41例HIV感染者外周血淋巴细胞DNA,设计特异性引物扩增其前病毒基因组中的vif基因,对于扩增阳性的29例PCR产物进行vif区基因的测序及分析。结果29条vif基因的平均离散率是0．0328,突变主要集中于90～120、270 -302、372～405、450～470四个区域。Vif多肽链的90～93位和157～160位存在两个富含R和K带有强烈正电荷的亲水区,带正电荷的R或K交替出现,几乎没有其他的氨基酸残基。29个Vif多肽链有21条在90～93位存在R90 RKR93基序;有26条在157-160位存在K157 RRK160基序,29条序列在114位和133位存在两个在HIV-1和HIV-2以及SIV内保守的半胱氨酸(A)。结论vif在HIV-1基因组内具有相对保守性,其特征性区域和氨基酸基序对于保持Vif蛋白的功能是十分重要的。

摘要：目的建立检测微量HIV-1 K103N耐药突变的等位基因特异扩增实时定量PCR（allele-specific real-time PCR，ASPCR）方法，用于微量K103N耐药突变的检测和分析。方法首先建立检测K103N耐药突变的ASPCR方法，然后对方法进行验证，最后采用ASPCR方法检测对照样本。构建含K103N突变的质粒作为标准品，然后设计特异性引物用以区分野生型和突变型模板，采用SYBRgreen法进行实时定量PCR，并绘制标准曲线。分别采用特异性和非特异性引物扩增模板，根据二者Ct（cycle threshold）值结合相应的标准曲线判断是否存在K103N突变及突变比例。对ASPCR检测K103N突变位点的特异性、敏感性、准确性、重复性等进行验证。结果特异性和非特异性引物扩增等量野生型模板的Ct值之差（△Ct）可达13．56；当突变比例小于0．1％时仍具有良好的准确性；批内变异系数小于0．7，批间变异系数小于1．6；检测灵敏度可达0．01％。检测阴性对照样本的△Ct显著高于临界值，阳性对照样本检测结果均为阳性。结论ASPCR是一种快速、灵敏、准确的检测HIV-1微量耐药突变的方法，可为临床抗病毒治疗提供理论指导。

摘要：目的：对一株从中国河南省一名艾滋病患者体内分离的、可在MT4细胞上稳定传代的未知病毒29A进行鉴定，确定该病毒种类及型别。方法：用从该患者外周血单核细胞中分离的病毒株感染MT4细胞，获得可在该细胞上稳定传代的病毒株29A。通过细胞病变特征、电镜观察结果、HIV-1 p24抗原检测以及HIV-1 pol区基因扩增结果，对该毒株是否为HIV-1进行鉴别。在电镜下对病毒感染细胞的超薄切片进行观察，发现该病毒呈现疱疹病毒形态特征，因此设计人类疱疹病毒6型（HHV-6）U69、U16／U17、U60／U66三个不同基因片段的特异性引物并进行巢式PCR扩增，对扩增产物进行序列测定和结果分析。结果：该毒株HIV-1 p24抗原检测为阴性；用HIV-1 pol区特异性引物未扩增出目的片段；细胞病变形态不同于HIV-1引起的病变；电镜观察该病毒直径为160～200nm，明显大于HIV—1，表明该传代株不是HIV-1。用人类疱疹病毒6型（HHV-6）U69、U16／U17、U60／U66等基因的特异性引物均扩增出了目的片段，序列分析的结果表明该毒株为HHV-6病毒B亚型。结论：在国内首次从艾滋病患者的外周血淋巴细胞中分离出HHV-6，为进一步研究HHV-6和HIV-1的相互作用奠定了基础。

摘要：葡萄球菌B型肠毒素(SEB)是重要的超抗原,依据SEB分子的晶体结构并结合表面分析,模拟设计了与MHCⅡ类分子和TCRVβ区亲合力降低的三位点突变体mSEB(Y89A,C93S,Y94A)。通过PCR重叠延伸法获得突变体基因,导入PBV220载体中,于***5α中获得高效表达,纯化的突变毒素T细胞激活活性仅为野生型毒素的1/5左右。

摘要：克隆河南人免疫缺陷病毒(HIV)感染者HIV-1B型株tat基因完整编码框序列,并分析比较其编码产物的序列结构特点。使用重叠PCR技术,从河南省1名HIV-1感染者外周血标本中扩增出tat基因第一和第二外显子并重组为完整的tat基因序列。获得的HIV-1B病毒株tat基因,第一外显子为263bp,第二外显子为214bp。将该基因编码产物与其他HIV-1株Tat蛋白经DNA软件编辑并翻译成蛋白质,使用ClustalX1.81进行多序列对比分析发现,第一外显子编码产物的3个保守区域的氨基酸组成大致相同,只有少数氨基酸存在差异。由于Tat蛋白不同病毒株间有高度保守的Cys富集区、核心区和碱性氨基酸富集区,tat基因的克隆为研究其功能并以其为靶点设计和筛选抗艾滋病的药物奠定了基础。